日常巡检：显微镜下的四个关键指标 每天开机后先扫视整瓶： 细胞形态保持鹅卵石单层，边缘无拉丝 培养液颜色无突变成橘黄或紫红 悬浮死细胞 5 % 菌丝或颗粒闪光立即...

SV40 Large T 抗原的“油门”机制 SV40 Large T 抗原通过双位点锚定 pRb 口袋结构域与 p53 核心区域，释放 E2F 转录因子并抑制 p21 表达。实验测得，pRb-E2F 复合体解离率 20 min 内升至 85 %，细胞在 12 h...

基因组修饰坐标 SV40T 片段整合于小鼠 11 号染色体 71.3 Mb 位点，单拷贝 PiggyBac 插入，两侧为 TTAA 靶点序列。全基因组测序显示插入后 SNV 负荷 1.8/Mb，Indel 负荷 0.3/Mb，均低于行业警示阈值 5/Mb。 ...

1 先厘清实验需求：动脉特异性还是通用内皮 SV40 永生化的小鼠颈动脉内皮细胞最突出的优势是保留剪切应力响应元件（KLF2、eNOS）。如果实验侧重动脉粥样硬化或血流动力学模型，应直接锁定“颈动脉来源”而...

细胞身份验证的强制阈值 STR 图谱必须覆盖小鼠 18 个核心位点，其中 14 个位点匹配率 ≥ 92 % 才签发批次合格证。任何等位基因漂移 8 % 即视为交叉污染，整批销毁并公开召回。原代来源组织需提供解剖影像...

复苏首日：时间轴与关键动作 收到干冰包裹立即拍照记录干冰余量，30 min 内置于 37 °C 水浴。震荡频率保持 80 rpm，管口始终在水面以上防止污染。90 s 内融化 90 % 冰晶后，逐滴加入 9 mL 预温完全培养基...

污染早期信号与应急处理 镜下发现细胞间隙闪光颗粒，48 h 内增殖停滞，多半为支原体。立即执行“三步净化”： 丢弃所有未处理培养瓶，防止气溶胶扩散。 用 BMEC-Detox 培养基（含 50 µg...

SV40 Large T 抗原的核定位密码 SV40 Large T 抗原携带两段核定位信号（NLS）：PKKKRKV 与 PAAKRV。进入胞浆后，importin-α/β 复合体识别 NLS，介导其穿越核孔。核内浓度在 2 h 内达到稳态，持续占据 p53...

基因组修饰架构 hTERT 插入位点位于大鼠 4 号染色体 q42 区域，采用 PiggyBac 转座系统实现单拷贝整合。载体骨架携带 puromycin-IRES-eGFP 双报告元件，读码框与 hTERT 共用同一启动子 CMV-early。Southern...

一、确定实验需求维度 在列表页浏览之前，先写下三个必须回答的问题： 研究是急性炎症模型还是长期屏障功能评估？ 是否需要荧光标记或基因编辑兼容性？ 预计细胞传代次数上限...

日常培养巡检 每天固定时段观察细胞形态与培养基颜色。微血管内皮细胞呈鹅卵石单层，一旦局部出现拉丝、脱落，预示基质缺胶或血清批次差异。立即补加 0.1 % gelatin 重新包被，并换用同一批号 FBS。 ...

细胞身份与遗传背景 原始组织：6–8 周龄 SPF 级 SD 大鼠肺微血管段 永生化方式：SV40 大 T 抗原慢病毒载体，CMV 增强子/β-actin 启动子，Puromycin 筛选标记 插入位点：Chr 10q32...