IL-18 技术参数：把“活性单位”换算成实验可重复数据的硬指标

比活性定义：WHO 标准与商用货的差距

WHO 第 1 代 IL-18 参考品（NIBSC 03/200）用 KG-1 细胞 IFN-γ 释放法标定：1 000 IU ≈ 50 ng。国内试剂盒常写“≥5×10? IU/mg”，却没有注明靶细胞。KG-1 与 PBMC 的 EC50 相差 6 倍，同一支 03/200 在两家平台给出 4.2×10? IU/mg 与 7.8×10? IU/mg 两种结果。下单前让厂家提供“cell-based reference curve”，把 IU 与 ng 对应关系写进 COA，才能在不同实验室之间复现。

纯度判读：还原 SDS-PAGE 与非还原 IEF 双轨

IL-18 前体含 193 aa，成熟肽 157 aa，理论 pI 6.2。非还原 IEF 出现 pI 6.4 条带说明第 36 位 Cys 形成错配二硫键，活性下降 30 %。采购协议里写明“非还原 IEF 单一条带，pI 6.1–6.3”，可把隐形失活体挡在门外。HPLC 纯度 ≥ 98 % 只是入门线，还原 SDS-PAGE 里 18 kDa 主带以外任何 ≥1 % 杂带都要质谱鉴定，防止截短体污染。

内毒素与宿主蛋白：双指标联动

IL-18 本身激活 NF-κB，LPS 0.1 EU/mg 就能把 PBMC 的 IFN-γ 背景抬高 3 倍。CHO 表达系统 HCP 残留 >100 ppm 时，人源单核细胞出现 CD14 下调，干扰功能实验。技术参数里同时写“LPS <0.01 EU/mg，CHO HCP <50 ppm”，并附原始 LAL 与 ELISA 曲线，才算完整。

冻干保护剂：海藻糖 vs 甘露醇差 8 % 活性

0.5 % 海藻糖冻干，37 °C 加速 4 周，活性保留 92 %；5 % 甘露醇仅 84 %。海藻糖玻璃态 Tg 高 12 °C，更能锁住 IL-18 的柔性 loop 区。采购时选“trehalose-based lyophilized”，若只有甘露醇配方，收货后 ?20 °C 避光储存，6 个月内用完。

分子量校正：18.3 kDa 还是 18.7 kDa

MALDI-TOF 测得 18 680 Da 说明 N 端甲硫氨酸未切除，体外活性只有 18 340 Da 成熟肽的 75 %。质谱报告里要求“observed mass = 18 340 ± 5 Da”，可把 Met-init 前体排除。批次文件附质谱图，省得自己再跑一遍。

储存浓度：0.1 mg/mL 是聚集临界点

动态光散射显示，0.1 mg/mL 以上 IL-18 在 4 °C 48 h 出现 40 nm 寡聚峰，EC50 漂移 1.8 倍。工作液先用 10 mM HCl 稀释到 0.05 mg/mL，再用 PBS-0.1 % CHAPS 稀释至实验浓度，CHAPS 抑制疏水界面吸附，24 h 内活性 CV <5 %。

生物读数线性区：IFN-γ 荧光斑点 50–800 SFU

PBMC 斑点实验里，IL-18 50 pg/mL 给出 50 SFU，800 pg/mL 达到平台 800 SFU，R2 = 0.99。试剂盒标注“线性范围 10–1 000 pg/mL”是把曲线强拉直线，实际 10 pg/mL 信噪比 1.2，定量误差 35 %。实验设计把剂量设在 50–800 pg/mL，可落在真实线性窗。

批间 CV 接受限：STAT3 磷酸化法 <12 %

用流式 pSTAT3 MFIRatio 比 ELISA 更敏感，三批次 IL-18 在 200 pg/mL 刺激 15 min，MFIRatio 批间 CV 15 % 直接拒收。把“pSTAT3 CV ≤ 12 %”写进技术协议，厂家会把复性缓冲液 pH 卡在 8.0 ± 0.05，省得自己反复验证。

文件链：IND 申报三件套

1. 质谱原始 raw file
2. 内毒素动态浊度法完整标准曲线
3. 体外活性 EC50 与 WHO 03/200 的桥接报告

随货同行，电子版本盖章，FDA 审评员一次通过。