PGE2 定量检测：从样本到数据只用 3 h 的操作使用速查

1. 样本收集管预冷 5 °C

PGE2 在 37 °C 每小时降解 8%，采血前把真空管埋冰里。用 K?-EDTA 管，拒绝肝素，肝素激活磷脂酶 A?，把 PGE2 前体 AA 释放，浓度虚高 15%。采完立刻 1 500 g 离心 10 min，血浆分装-80 °C，冻融一次损失 <6%。

2. 柱提法去脂 30 s

高脂血清浊度 >300 NTU，ELISA 背景 OD 抬高 0.05。用 100 μL 血浆 + 200 μL 甲醇，涡旋 10 s，12 000 g 离心 1 min，上清直接用于检测，回收率 92%，把脂血干扰压回 ±5%。

3. 标准品解冻节奏

冻干标准品用 250 μL 去离子水复溶，室温静置 10 min，轻晃 5 次，避免剧烈吹打产生泡沫。复溶后 4 °C 仅稳定 4 h，分装 50 μL/管-70 °C 可存 30 天，二次冻融偏差 3%，文章里直接写“二次冻融可接受”，审稿人不再追问。

4. 板布局写进编号

96 孔板分 3 列空白、3 列零标准、10 列梯度、2 列高/低质控，用记号笔在板侧边写编号，防止孵育时盖子错位。每块板带一条校准曲线，拒绝共用曲线，能把批间斜率差从 12% 压到 4%。

5. 一步法 vs 两步法时间差

一步法 1 h 孵育，适合样本 <40 个；两步法先 2 h 捕获再 1 h 检测，灵敏度从 15 pg/mL 提到 5 pg/mL，适合滑液、脑脊液低浓度样本。做关节炎研究直接选两步法，能把基础值 8 pg/mL 的波动显出来。

6. 底物计时用秒表

TMB 显色 15 min 是动力学平台，第 12 min 提前看板，高标孔出现浅蓝即可终止。加 100 μL 1 M H?SO?，顺序从低浓度到高浓度，避免枪头带蓝，终止后 5–30 min 内读 450 nm，延迟 10 min OD 掉 3%，用 630 nm 做参比能把漂移拉回 1%。

7. 洗板机残液体积校准

设定 300 μL 注液/孔，抽吸 1 s，残液量 ≤2 μL。用电子天平称空板质量，洗后称一次，差值 ÷96 得平均残液。>3 μL 时检查针头堵塞，用 0.1% 次氯钠浸泡 15 min，再纯水冲洗 5 循环，残液回到 1.8 μL，背景 OD 立降 0.02。

8. 数据处理模板

Excel 模板内置四参数 Logistic 拟合，强制底部 0、顶部 1，R2 ≥0.998 才通过。高值溢出样本用 1:4 稀释，回算乘系数，模板自动标黄，防止手抄乘错。把原始 OD、拟合方程、稀释系数三页打包上传实验室系统，审计追踪直接秒过。

9. 异常值现场排查

• 空白 OD >0.05：底物污染或洗板不彻底，换新底物重测。
• 零标准 OD 低：酶标抗体失活，4 °C 储存 >30 天，立即换新。
• 高质控掉值：复溶标准品放置 >4 h，活性降 20%，重新开瓶。

10. 废液与板子处理

终止液 pH <2，用碳酸氢钠颗粒中和到 pH 7 再倒。TMB 含 0.01% 过氧化氢，无重金属，可直接下水。板子 70% 乙醇泡 30 min 可当普通塑料回收，但重复利用读数 CV 会翻倍，建议一次性发文章，数据干净。