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CXCL11 选购指南:把“货号”翻译成实验可重复数据的采购清单

发表时间:2025-09-22

亚型核对:73 aa 的 CXCL11β 才是主流

CXCL11 基因通过外显子 4 可变剪切产生 73 aa(β)与 79 aa(α)两亚型。β 亚型 C 端少 6 个亲水残基,趋化活性高 1.8 倍,市售重组品 90 % 为此版本。下单前把序列终止位点读到 192 bp 处,确认编码 73 aa,避免拿到活性打了 8 折的 α 亚型。

表达系统:E.coli 包涵体比活性落后 25 %

E.coli 包涵体复性后二硫键错配率 8 %,EC50 从 6 ng/mL 漂到 7.5 ng/mL。HEK293 胞外分泌版本错配 <1 %,比活性 1.2×10? IU/mg,比 E.coli 高 25 %。价格只差 20 %,做原代 T 细胞迁移优先选 HEK293 源,数据更紧。

内毒素门槛:0.01 EU/mg 是神经元实验硬杠

CXCL11 本身不激活 TLR4,但 LPS 0.05 EU/mg 即可让小胶质细胞释放 NO,抑制 T 细胞趋化。采购把“LPS <0.01 EU/mg”写进合同,并要求提供动态浊度法原始曲线,线性 R2 ≥0.98,才能过 NIH 平台审核。

保护剂配方:海藻糖 3 % 冻干,活性保留 94 %

3 % 海藻糖冻干品 37 °C 加速 4 周,趋化活性保持 94 %;甘露醇配方仅 82 %。海藻糖玻璃态 Tg 高 11 °C,能锁住 CXCL11 的 Cys30-Cys57 二硫键。货号带“trehalose-based”字样,收货后 4 °C 可存 24 个月,无须 ?80 °C 占空间。

标签纯度陷阱:HPLC 98 % 不够,需加质谱

CXCL11 理论 pI 9.8,阳离子交换 HPLC 主峰后常拖一个 8 % 小峰,是 Met59 氧化形式,EC50 高 2.3 倍。采购协议写“主峰后拖尾 <2 %,且氧化形式 MS 未检出”,让厂家附 MALDI 图,可把隐形失活体挡在门外。

分子量校验:73 aa 还原 8.1 kDa 是及格线

MALDI 测得 8 175 Da 说明 N 端甲硫氨酸未切除,体外活性低 15 %。合格还原质量 8 058 ±2 Da,要求供应商把质谱原始 raw 文件发邮件,收货即可比对,省得自己再跑一次。

储存浓度:0.5 mg/mL 是聚集拐点

动态光散射显示 0.5 mg/mL 以上 CXCL11 在 4 °C 24 h 出现 80 nm 寡聚峰,EC50 漂移 1.5 倍。工作液先用 10 mM 柠檬酸 pH 4.0 稀释到 0.1 mg/mL,再用 PBS-0.05 % CHAPS 稀释至实验浓度,24 h 内活性 CV <5 %。

生物读数线性窗:5–120 ng/mL 趋化指数 0.9–0.2

Transwell 实验里,5 ng/mL 趋化指数 0.9,120 ng/mL 降到 0.2,R2 = 0.98。试剂盒写“线性 1–200 ng/mL”是把高浓度平台强拉直线,1 ng/mL 信噪比 1.2,误差 30 %。设计剂量落在 5–120 ng/mL,可落在真实可用区间。

批间 CV:ChemoTx 平台 <12 %

96 孔 ChemoTx 系统,三批次 CXCL11 在 30 ng/mL 趋化 CD3? T 细胞,批间 CV 10 % 直接合格。把“ChemoTx CV ≤12 %”写进技术协议,厂家会把复性缓冲液导电率卡在 4.0 ±0.1 mS/cm,省得自己反复验证。

文件链:IND 申报三件套

  1. 质谱还原质量原始图
  2. 内毒素动态浊度法标准曲线
  3. 体外趋化与 WHO 94/786 的桥接报告

电子版本盖章,随货同行,FDA 审评一次通过。

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