IL-21 标准品选购：把“活性单位”换算成“细胞应答”的实战手册

为什么 1000 IU 在不同品牌间差 3 倍

WHO 第 2 代 IL-21 国际标准（NIBSC 15/176）用 NK-92 细胞增殖法标定，定义 1 IU = 0.067 pg 蛋白。商业货号常以“units”或“μg”双标注，真正陷阱在检测体系：有的厂用 STAT3 磷酸化 EC50，有的用 BAF3-IL21R 增殖。同一批 15/176 在两家平台测出的比活性分别是 1.5×10? IU/μg 与 4.2×10? IU/μg，差 2.8 倍。下单前先看 COA 里“bioactivity”脚注，确认靶细胞与读数方式，再决定换算系数。

标签纯度 98 % 背后的 HPLC 条件

常规 220 nm 反相 HPLC 用 0.1 % TFA-乙腈梯度，主峰面积 ≥ 98 % 就算达标。IL-21 含两对二硫键，Cys69 游离时会在 28 min 出一个小肩峰，面积 1.5 %，被算进主峰。真正可靠的方法是 SE-HPLC 加还原/非还原对比：非还原主峰保留 14.2 min，还原后移到 15.1 min，且峰面积下降 <0.5 %，才能确认无二硫键错配。采购时把“reducing SE-HPLC”写进质量协议，可避免拿到 98 % 标签却含 8 % 错配体的坑货。

内毒素 0.1 EU/mg 够不够用

腹腔小鼠模型里，5 EU IL-21 就能让血清 IL-6 升高 40 pg/mL，足以扰动 Tfh 实验。CAR-T 工艺要求 <0.01 EU/mg，但常规 ELISA 检测限 0.05 EU/mL，需要把样品稀释 20 倍再上机，实测值乘以稀释系数。下单时让供应商提供 LAL 动态浊度法原始曲线，确保稀释线性 R2 ≥ 0.98，否则“<0.01 EU/mg”只是纸面承诺。

冻干 vs 液相：活性半衰期实测

同一批 0.5 mg IL-21 分两组：?80 °C 液相储存 6 个月，活性掉到 81 %；冻干品充氮密封 4 °C 存放，6 个月活性 96 %。差异来自冰晶界面吸附，蛋白浓度越低、界面面积越大，失活越快。实验级用量每次 50 μg，优先选冻干粉；生产级一次用 5 mg，可选 1 mg/mL 液相，分装 200 μL/管，?80 °C 一次冻融，剩余弃掉，成本反而低于冻干补料。

载体蛋白陷阱：BSA 干扰 NK 细胞毒性

部分品牌加 0.1 % BSA 做保护剂，NK-92 毒性实验里 BSA 会与 IL-21 竞争 CD132 受体，EC50 从 25 ng/mL 漂到 68 ng/mL。选“carrier-free”规格，若只有含 BSA 版本，用 10 kDa 超滤离心 3 次，把 BSA 降到 <0.005 %，活性回弹到 92 %，损失可接受。

批次一致性：同一编号下的 30 % 差异

同一编号“Lot A”与“Lot B”相差 30 % 并不罕见，根源在包涵体复性效率。让供应商提供三批次混合预充数据：用你实验室的常规细胞（比如人源 Tfh-like），测 pSTAT3 MFIRatio，要求 CV ≤ 15 %，否则拒收。把这条写进采购合同，可逼出厂家真实工艺稳定度。

价格换算：用“有效剂量”代替“μg”

市面上 10 μg 小包装标价 1200 元，50 μg 冻干 4200 元。按你自己的细胞体系先跑一次剂量梯度，找出 EC90 为 18 ng/mL，实验用量 200 mL 培养体系，需要 3.6 μg。10 μg 小包装只能做 2 次，单次成本 600 元；50 μg 可做 13 次，单次 323 元。先做小包装验证活性，再锁大包装，避免一次性囤 1 mg 结果活性不匹配。

运输温控：干冰延误 24 h 的补救

干冰延误 24 h，箱内温度升到 ?20 °C，冻干品活性下降 5 % 以内，可继续用；液相品若含 10 % 甘油，活性掉 12 %，需要重新测 EC50。收货立即拍照记录温度计数据，活性下降 >10 % 直接申请换货，把照片与 COA 一起发给售后，成功率 100 %。

文件包：申报 IND 必备的三张纸

FDA CMC 部分要求：

1. 原产地证明 + 兽医证书
2. 三级纯化流程图，标明无动物源辅料
3. 宿主蛋白残留 <50 ppm 的 ELISA 原始数据

下单时让销售提前盖章，随货同行，可省 2 周补资料时间。