行业标准：ELISA 背景 < 0.05 AU 才是“可用级” HRP

辣根过氧化物酶试剂盒出厂前必须用 1 ng mL?1 山羊抗兔-HRP 做 ELISA，空白孔 450 nm 吸光度 ≤ 0.05 AU 才能贴“KTL0100”批次。背景高于 0.08 AU 的批次被降档为“教学级”，流进课堂不上市面。采购时把这条数值写进 URS，质检部收货直接省一次自检。

RZ 值 3.0：纯酶与标记效率的硬杠杆

HRP 纯度用 RZ（A???／A???）衡量，RZ 3.0 表示铁卟啉占蛋白 25 %，偶联时每个抗体分子挂 2–3 个 HRP，标记比 1 : 3 最稳定。RZ 2.0 的酶铁卟啉少 30 %，同样摩尔比只能挂 1 个 HRP，ELISA 信号掉一半。KTL0100 只收 RZ ≥ 3.0 的原料，标签上印 RZ 实测值，拒绝“概念酶”。

标记比 1 : 4：高碘酸钠氧化让糖链“长出”醛基

过碘酸钠 8 mM 15 min 把 HRP 糖链邻二醇切成二醛，醛基与抗体ε-NH? 形成席夫碱，硼氢化钠 4 °C 还原 30 min，标记比锁定 1 : 4。比例升到 1 : 8，抗体空间位阻大，ELISA 本底升高 3 倍；降到 1 : 2，信号不足，灰度值掉到 40 %。试剂盒把氧化剂与还原剂预分装在棕色安瓿，扫码自动弹出摩尔计算器，新手也能一次配准。

抗体投入量 100 μg：标记曲线平台起点已标红

KTL0100 标记曲线显示，100 μg 抗体进入平台，HRP 偶联效率 ≥ 95 %；低于 50 μg 抗体，酶过量 10 倍，回收率 60 %；高于 200 μg 抗体，醛基被占满，标记比反而下降。说明书把 100 μg 画成红色虚线，现场不用摸索，一次投入不浪费抗体。

游离酶去除：Superdex 200 10/300 一次搞定

标记后游离 HRP 残留 < 5 % 才能通过质检。KTL0100 提供预装柱，流速 0.5 mL min?1，0.2 M PBS 洗脱，游离酶 14 mL 流出，偶联物 8 mL 收集，15 min 完成纯化。柱效 13 000 plates m?1，回收率 90 %，比超滤管省 30 min，不会出现“浓缩后酶失活”的投诉。

酶活保留率：ABTS 法 30 °C 10 min ≥ 95 %

标记后 HRP 酶活用 ABTS 测定，30 °C 10 min 吸光度 ≥ 1.0 AU 为 100 % 活性。KTL0100 要求保留率 ≥ 95 % 才能出厂，低于 90 % 整批报废。质检报告附带 ABTS 曲线，用户收到后 5 min 复测，误差 < 5 % 即签字放行。

4 °C 储存：0.05 % NaN? 让偶联物 18 个月零衰减

HRP-抗体偶联物在 0.05 % NaN?、4 °C 避光储存，18 个月酶活衰减 < 5 %。NaN? 浓度升到 0.1 % 会抑制 HRP 活性，降到 0.02 % 长菌，瓶壁长出白色菌膜。KTL0100 把 NaN? 预调到 0.05 %，棕色瓶避光，用户收到直接放 4 °C，无需再加防腐剂。

现场验收：1 μg mL?1 羊抗鼠-HRP 5 min显色即合格

新到一盒 KTL0100，取 1 μg mL?1 羊抗鼠-HRP，ABTS 底物 30 °C 反应 5 min，450 nm 吸光度 ≥ 1.0 AU，背景 ≤ 0.05 AU 即签字收货。5 min 完成验收，比测 RZ、测蛋白浓度省事，现场就能判定退货还是留用。