技术参数里的“抗兔”黄金线:protein A 与兔 IgG 的 KD 0.3 nM
发表时间:2025-11-05KTI1020-CN 把 protein A 密度锁在 65 μg mg?1 磁珠,对兔 IgG 实测 KD 0.3 nM,1 mg 磁珠可拉 25 μg 抗体。蛋白浓度低于 0.5 μg mL?1 时,载量仍保持 90 %,做低丰度转录因子 Co-IP 也能一次拉出条带。选磁珠先看 KD 值,再看 mg 抗体容量,否则背景洗到脱色仍看不见目标。
1 μm 粒径沉降曲线:30 s 磁吸=高通量临界点
1 μm 磁珠在 0.5 T 磁场 30 s 贴壁完成,96 孔板同时处理 96 份样品,总操作 45 min。粒径降到 0.5 μm 需 90 s 沉降,时间翻倍;2.8 μm 磁珠 10 s 沉降,但比表面积小 25 %,抗体载量掉档。KTI1020 把粒径卡在 1 μm,抗兔通道速度与载量同时封顶。
封闭 0.5 % 酪蛋白:让抗兔通道信噪比从 3 升到 18
传统 5 % 脱脂奶粉含牛 IgG,protein A 一并拉下,银染 55 kDa 杂带。KTI1020 工具箱配 0.5 % 酸水解酪蛋白,无 IgG 残留,封闭 15 min 即可把灰度背景压到 3 单位,兔单抗 0.2 μg 也能拉出清晰互作条带。
抗体用量 1 μg:饱和曲线平台起点已标红
抗兔 IgG 平台区间 1–2 μg/1 mg 磁珠,低于 0.5 μg 回收率 65 %,高于 3 μg 抗体自我聚集,非特异结合飙升。KTI1020 管壁贴橙色刻度“1 μg”,新人一次加准,不再靠“老师傅手感”。
消化洗脱 pH 2.7:5 min 让 protein A 零脱落
0.1 M 甘氨酸 pH 2.7 洗脱 5 min,立即 1 M Tris 中和,protein A 脱落率 < 1 %,下游质谱不出现 45 kDa 污染肽段。Co-IP-MS 数据里“抗兔重链”假阳性直接清零。
磁架 0.55 T:96 孔边缘孔与中心孔场强差 < 5 %
廉价磁架边缘场强掉到 0.2 T,1 μm 磁珠 45 s 才贴牢,倒板时一起吸走。KTI1020 配套磁架 6 mm 间距,中心与边缘差 < 5 %,30 s 完成贴壁,CV 值压到 4 % 以内。
再生 20 次:0.2 % 乙酸 + 0.5 M NaCl 替代 NaOH
protein A 在 0.1 M NaOH 半衰期 8 min,循环 3 次载量掉 20 %。工具箱把 CIP 换成 0.2 % 乙酸 + 0.5 M NaCl,寿命拉到 20 次,单样本试剂成本降到 1/6。
?80 °C 分装:100 μL 小管让冰晶零损伤
磁珠悬液含 20 % 甘油,?20 °C 冰晶划伤让 protein A 脱落 10 %。KTI1020 预分装 100 μL 小管,?80 °C 速冻,用前室温回温 3 min,一管一次性用完,背景干净如新。
现场验收:500 μg 兔脑裂解液拉 GAPDH 5 min 过线
新到一盒 KTI1020-CN,取 1 μg 抗兔 GAPDH,500 μg 兔脑裂解液,洗脱液跑 SDS-PAGE,GAPDH 36 kDa 条带灰度 ≥ 上一批 95 %,重链 55 kDa 残留 < 3 % 即签字收货。5 min 完成验收,现场判定退货还是留用。

