磁珠偶联的“抗体陷阱”：protein A/G 与抗鼠 IgG 谁抓谁

KTI1010-CN 把 protein G 密度锁在 55 μg mg?1 磁珠，专门开一条“抗小鼠”通道。小鼠 IgG1 与 protein A 结合力弱，KD≈10?? M，常被漏捕；protein G 对小鼠 IgG1 KD≈10?? M，一步拉净。工具箱里直接预装 protein G 磁珠，省去“protein A 抓不住再换 G”的对比时间，Co-IP 重复三次误差条直接缩到 5 % 以内。

粒径 1 μm 沉降曲线：30 s 磁吸是高通量生命线

1 μm 磁珠在 0.5 T 磁场里 30 s 完成 95 % 贴壁，96 孔板同时处理 96 个样本，总操作时间 45 min。粒径降到 0.5 μm 需 90 s 才能贴牢，时间翻倍；2.8 μm 磁珠 10 s 沉降，但比表面积小，抗体载量掉 20 %。KTI1010 选 1 μm 作为“抗鼠”标配，把速度与载量卡在拐点，做磷酸化筛选也能稳住通量。

封闭液 0.5 % BSA 的隐藏坑：牛 IgG 污染抗鼠通道

市售 BSA 里 0.1 % 牛 IgG 残留，protein G 一并拉下，银染出现 55 kDa 杂带。工具箱配 0.5 % 酸水解酪蛋白，分子量 1–3 kDa，无 IgG 背景，封闭 15 min 即可让抗小鼠通道信噪比从 3 升到 15。封闭剂瓶身贴红标“抗鼠专用”，现场不会拿错。

抗体用量 2 μg：protein G 磁珠饱和曲线已经算好

KTI1010-CN 说明书给出“2 μg 抗小鼠 IgG/1 mg 磁珠”红线，来源于饱和曲线平台起点。低于 1 μg 平台未饱和，目标蛋白回收率 60 %；高于 5 μg 抗体自我聚集，非特异结合飙升。平台区间 2–3 μg 被做成橙色标签贴在管壁，新手也能一次加准，不再靠“经验主义”。

消化洗脱：pH 2.5 甘氨酸 5 min 让蛋白 G 零脱落

传统 0.2 M 甘氨酸 pH 2.0 洗脱 10 min，protein G 脱落率 6 %，质谱多出 45 kDa 污染肽段。工具箱把 pH 调到 2.5，时间缩到 5 min，立即用 1 M Tris 中和，protein G 残留 < 1 %，Co-IP-MS 数据里再没“抗小鼠重链”假阳性。

磁架兼容：96 孔板磁铁间距 6 mm 才能贴壁完全

廉价磁架间距 8 mm，边缘孔磁场强度掉到 0.2 T，1 μm 磁珠 45 s 才贴牢，倒板时一起被吸走。KTI1010 配套磁架 6 mm 间距，中心与边缘场强差 < 5 %，30 s 完成贴壁，倒上清不用手抖，96 个 CV 值一口气压到 4 % 以内。

再生 20 次：0.2 % 乙酸 + 0.5 M NaCl 替代 NaOH

protein G 在 0.1 M NaOH 里 25 °C 半衰期 8 min，循环 3 次载量掉 20 %。工具箱把 CIP 换成 0.2 % 乙酸 + 0.5 M NaCl，15 min 一次，寿命拉到 20 次，成本降到 1/6。SOP 把 NaOH 浓度直接删掉，新人不会随手泡碱，整盒磁珠寿命延长 6 倍。

分装 100 μL 管：?80 °C 速冻让磁珠零冰晶

磁珠悬液含 20 % 甘油，?20 °C 冷冻出现针状冰晶，protein G 层脱落 10 %。工具箱预分装 100 μL 小管，?80 °C 速冻，用前室温回温 3 min，一管一次性用完，背景干净得像新拆封。

现场验收：拉 500 μg 小鼠裂解液看 GAPDH 带型

新到一盒 KTI1010-CN，取 2 μg 抗小鼠 GAPDH，500 μg NIH3T3 裂解液，洗脱液跑 SDS-PAGE，GAPDH 36 kDa 条带灰度 ≥ 上一批 95 %，重链 55 kDa 残留 < 3 % 即签字收货。5 min 完成验收，比测载量、测粒径省事，现场就能判定退货还是留用。