永生化触发：hTERT 与 SV40 协同开关 hTERT 催化端粒延伸，SV40 大 T 抗原抑制 p53/Rb 路径，两者以 P2A 自剪切肽串联。转染后第 3 天端粒酶活性升高 25 倍，p21 表达跌至原代的 12 %，细胞突破 Hayflick ...

细胞身份与来源 STR 20位点图谱与ATCC HTB-19胚乳瘤库同源度97%，SV40大T抗原插入位点锁定于12q15区域，qPCR检测拷贝数2.1±0.2 copies/cell，批次间CV5%。 倍增动力学 DMEM/F12+10% FBS条件下...

细胞身份确认：STR 与 SV40Tt 插入指纹 下单前索要 STR 20 位点报告，比对 ATCC 人源库 ≥98% 匹配。SV40Tt 整合位点固定在 7 号染色体 128.4 Mb 区域，qPCR 检测拷贝数 1.8–2.2 copies/cell。偏离即视为...

污染哨兵：每周支原体 qPCR 巡检 培养第 3、6、9 天各取 200 µL 上清，16S rRNA qPCR Ct ≥ 35 才算安全。Ct 34–32 区间属于灰区，立刻用 BM-Cyclin 处理一代并复检。Ct 32 直接整瓶销毁，防止 hTERT 序...

双基因协同永生化设计 SV40大T抗原封闭p53/Rb检查点，hTERT持续延伸端粒。二者通过P2A自剪切肽构建单开放读码框，摩尔表达比锁定1∶1。该比例下细胞在P30代端粒长度仍维持12–15 kb，与原代差距5%，避免危...

细胞身份溯源标准 STR-禽源指纹图谱必须≥16个位点匹配度≥98%，同时线粒体COI基因序列与Anas platyrhynchos参考序列差异0.3%。第三方复核由AAVCL（亚洲禽类细胞库）执行，每批次出具可追溯报告编号。 ...

复苏起点：水浴震荡频率与细胞存活率 冻存管从液氮取出后置于37 ℃水浴，轻柔水平震荡120 rpm，90 s内融化。巨噬细胞对温度骤变敏感，震荡不足会形成冰晶刺膜，存活率直降35%；震荡过度产生剪切力，同样损...

永生化机制：MYC-ER(TAM)诱导系统的时空调控 c-MYC融合雌激素受体突变体（ERTAM）通过4-羟基他莫昔芬（4-OHT）激活，48 h内驱动细胞周期进入S期效率90%。成纤维细胞额外表达Bcl-xL，抑制MYC诱导的凋亡，维...

品系溯源：SV40大T抗原的“永生开关” SV40大T抗原通过抑制p53与Rb通路，阻断细胞周期检查点，诱导端粒酶持续表达，让原代猪巨噬细胞与成纤维细胞跨越Hayflick极限。市面主流品系分两类： PigMac...

拿到就能写进合同附件的硬核数字。 细胞身份与背景 品系编号 MCEC-HPV16e6e7，来源于 8 周龄 C57BL/6 雌鼠左心室微血管段。原代分离后流式鉴定：CD31⁺ 97.3 %，CD34⁺ 2.1 %，LYVE-1⁻ 99 %，排除淋...

SV40 早期区域怎样在 8 μm 孔径的心脏微血管里重新编写细胞命运。 SV40 Large T 的双锁开关 Large T 抗原携带 LXCXE 基序与 pRb 口袋区咬合，同时通过 NLS 序列把 p53 拖进核内降解。心脏微血管内...

把一次冻存事故扼杀在摇瓶之前。 日常巡检：显微镜下的 30 秒诊断 相差 10× 视野内出现黑点时，先用 400× 确认运动性。支原体污染在 400× 呈布朗运动，碎片静止。发现运动颗粒立即做 Hoechst 33...