实验前环境设置 CCL2 在血清中的基础浓度低至 10 pg/mL，操作台应独立分区。台面提前用 0.5 % 次氯酸擦拭，风干后再以 70 % 酒精二次清洁，避免外源内毒素诱导单核细胞分泌额外 CCL2。空调风速调为 0.25 m/...

基因背景与构建策略 SV40 大 T 抗原片段长度 2.7 kb，插入位点选在 AAVS1 安全港，利用 CRISPR/ Cas9 敲入后通过嘌呤霉素筛选。Cas9 表达框由 CAG 启动子驱动，两侧配置 WPRE 与 bGH polyA，保证心肌细胞高...

背景与需求定位 原代胰腺成纤维细胞在体外只能维持 5–8 代，很快进入衰老期，无法支撑长周期实验。SV40 大 T 抗原介导的永生化技术突破了这一限制，使细胞获得持续增殖能力，同时保留胰腺微环境分泌表型。...

培养箱微环境巡检 温度与 CO₂ 探头每月校准一次，误差范围 ±0.1 °C 与 ±0.05 %。断电重启后，先空箱运行 2 h；细胞放回前用独立温度计确认 37 °C 平台稳定，避免 SV40T 因温度应激触发 p53 残留活性，...

细胞身份与命名规则 官方编号：CAF-HPV-Immortal-23P 规则：CAF 指癌相关成纤维，HPV 代表 E6/E7 永生化基因，23P 为 2023 年建系批次。STR 核心位点 D5S818=11,12；D13S317=9,11；D7S820=10,10，与...

SV40 大 T 抗原：拆掉细胞周期的两把锁 SV40 大 T 抗原进入细胞核后，先后与 Rb、P53 蛋白结合。Rb 被磷酸化失活，E2F 转录因子得以释放，G1-S 关卡失效；P53 被泛素化降解，细胞凋亡程序被静音。双重刹车...

先确认“CAF”身份：原代来源决定功能天花板 CAF 来源于肿瘤组织而非正常成纤维，选购时索要病理报告：肿瘤类型、分化级别、取材部位。乳腺癌 CAF 与胰腺癌 CAF 分泌谱差异可达 10 倍。供应商若无法提供病...

复苏：90 秒水浴与 24 小时静养 冻存管从液氮取出后，37 °C 水浴精确计时 90 秒，管中冰晶刚好消失即可。提前在 15 mL 离心管里预置 9 mL 完全培养基，细胞悬液沿管壁缓慢滴入，边滴边轻摇，稀释 DMSO 毒...

命名规范与身份唯一性 行业公认格式：物种-组织来源-永生化策略-编号。3359 代表 2023 年第 359 条入库记录，避免与早期批次混淆。官方全称为 HPSC-3359-hTERT/SV40，任何缩写缺失均被视为不合规。STR 位点...

环境稳定性巡检清单 培养箱每 24 h 记录一次温度与 CO₂ 浓度，允许误差 ±0.2 °C 与 ±0.1 %。每月拆洗水盘并更换无菌去离子水，防止真菌挥发孢子落入培养皿。遇到断电重启，先将箱内温度拉回 37 °C 再置...

细胞身份与编号体系 官方命名：HPSC-3223-hTERT/SV40 内部编号：3223 代表 2023 年 3 月建系的第 2 株，避免与早期批次混淆 STR 指纹：D5S818=11,12；D13S317=9,11；D7S820=10,12；...

双基因协同：突破衰老的两道闸门 原代子宫内膜基质细胞在体外经历复制衰老，主要由 p53/p21 和 Rb/p16 通路触发。SV40 大 T 抗原（SV40T）通过结合 p53 与 Rb 蛋白，解除细胞周期阻滞；hTERT 补充端粒酶活...