病毒大T抗原的结构钥匙 SV40大T抗原由708个氨基酸折叠成六个结构域，其中p53结合域（aa 350–450）与Rb口袋蛋白结合域（aa 100–250）是永生化核心。冷冻电镜显示，大T进入细胞核后形成六聚体环状结构，像...

1. 明确实验需求：从科学问题倒推细胞特性 下丘脑神经元研究通常围绕能量代谢、昼夜节律、神经内分泌三大方向。不同方向对细胞系的电生理活性、激素分泌谱、受体表达丰度有显著差异。以能量代谢研究为例，...

污染源监控：HPV-E6/E7 表达漂移预警 每月做一次 E6/E7 转录水平 qPCR，ΔCt 较基准批次变化 1.5 即视为表达漂移。漂移往往伴随支原体潜伏感染，需同步做 16S rRNA 快检，Ct ≥ 38 才算安全。 培养...

永生化触发：hTERT 与 SV40 协同开关 hTERT 催化端粒延伸，SV40 大 T 抗原抑制 p53/Rb 路径，两者以 P2A 自剪切肽串联。转染后第 3 天端粒酶活性升高 25 倍，p21 表达跌至原代的 12 %，细胞突破 Hayflick ...

细胞身份与来源 STR 20位点图谱与ATCC HTB-19胚乳瘤库同源度97%，SV40大T抗原插入位点锁定于12q15区域，qPCR检测拷贝数2.1±0.2 copies/cell，批次间CV5%。 倍增动力学 DMEM/F12+10% FBS条件下...

细胞身份确认：STR 与 SV40Tt 插入指纹 下单前索要 STR 20 位点报告，比对 ATCC 人源库 ≥98% 匹配。SV40Tt 整合位点固定在 7 号染色体 128.4 Mb 区域，qPCR 检测拷贝数 1.8–2.2 copies/cell。偏离即视为...

污染哨兵：每周支原体 qPCR 巡检 培养第 3、6、9 天各取 200 µL 上清，16S rRNA qPCR Ct ≥ 35 才算安全。Ct 34–32 区间属于灰区，立刻用 BM-Cyclin 处理一代并复检。Ct 32 直接整瓶销毁，防止 hTERT 序...

双基因协同永生化设计 SV40大T抗原封闭p53/Rb检查点，hTERT持续延伸端粒。二者通过P2A自剪切肽构建单开放读码框，摩尔表达比锁定1∶1。该比例下细胞在P30代端粒长度仍维持12–15 kb，与原代差距5%，避免危...

细胞身份溯源标准 STR-禽源指纹图谱必须≥16个位点匹配度≥98%，同时线粒体COI基因序列与Anas platyrhynchos参考序列差异0.3%。第三方复核由AAVCL（亚洲禽类细胞库）执行，每批次出具可追溯报告编号。 ...

复苏起点：水浴震荡频率与细胞存活率 冻存管从液氮取出后置于37 ℃水浴，轻柔水平震荡120 rpm，90 s内融化。巨噬细胞对温度骤变敏感，震荡不足会形成冰晶刺膜，存活率直降35%；震荡过度产生剪切力，同样损...

永生化机制：MYC-ER(TAM)诱导系统的时空调控 c-MYC融合雌激素受体突变体（ERTAM）通过4-羟基他莫昔芬（4-OHT）激活，48 h内驱动细胞周期进入S期效率90%。成纤维细胞额外表达Bcl-xL，抑制MYC诱导的凋亡，维...

品系溯源：SV40大T抗原的“永生开关” SV40大T抗原通过抑制p53与Rb通路，阻断细胞周期检查点，诱导端粒酶持续表达，让原代猪巨噬细胞与成纤维细胞跨越Hayflick极限。市面主流品系分两类： PigMac...