1. 先锁定检测对象：VEGF-A 并不只有一条肽链 人 VEGF-A 经选择性剪接产生 VEGF₁₂₁、VEGF₁₄₅、VEGF₁₆₅、VEGF₁₈₉、VEGF₂₀₆ 等亚型，血清里 80% 是 VEGF₁₆₅，肿瘤积液里 VEGF₁₂₁ 比例升高。抗体若识别 121-16...

1. 抗原形态决定读数：血清里 90% 是三聚体，单体只占 3% TNF-α 在溶液里以三聚体稳定存在，单体半衰期 30 s。捕获抗体若识别单体线性表位（如 59-80 aa），三聚体立体屏蔽导致结合率下降 40%。选抗体对时...

1. 检测下限 ≠ 功能灵敏度，官方数据 1.2 pg/mL 实测只能到 9 pg/mL 说明书标注 LOD 用空白均值+3SD 算，血清基质里非特异性结合高 3 倍。功能灵敏度（20% CV 对应的最低值）才是真实门槛。把 8 块板 6 批...

1. 行业标准里找不到的“隐标准”：活性 vs 总蛋白 药典和 ISO 对 TGF-β1 ELISA 只规定灵敏度、回收率、批间 CV，却不区分“总 TGF-β1”与“活性 TGF-β1”。实验室拿到的血清样本 95% 以上是潜伏复合体...

1. 先确认测的是谁：RETN 还是 RETN1？ 抵抗素基因符号在 NCBI 被归并成 RETN，但早期文献里 RETN1、XCP1、HXCP1 仍在流通。采购前把基因 ID 锁定到 56729，核对试剂盒抗体针对的抗原表位位于成熟肽段 17-1...

1. 检出限 4 pg/ml：EP-17 报告才是硬通货 厂家标“4 pg/ml”常用“零孔均值+3SD”算法，LOQ 实际可能 12 pg/ml。 EP-17 方案要求 60 空白、3 批次、2 台仪器，LOB 1.5 pg/ml、LOD 4 pg/ml、LOQ 10 p...

1. 检出限 30 pg/ml：按 EP-17 还是“零孔+3SD” 真检出限需 60 次独立空白、3 批试剂、2 台仪器算 EP-17。厂家写“30 pg/ml”常按“零孔均值+3SD”充数，LOQ 实际 80 pg/ml。索要 EP-17 报告，报告里缺任...

1. 卤素灯寿命 800 h，第 700 h 就写换灯备忘录 瘦素浓度在 0.5–50 ng/ml 区间，标曲高端 OD 需冲到 2.8。卤素灯 700 h 后光强衰减 10 %，高端值掉到 2.5，低值样本被整体拉低 8 %。提前把灯编号贴到仪器...

1. 目标分子真面目：p19+p40 异源二聚体 IL-23 由 IL-12p40 与 IL-23p19 通过二硫键铰链而成，分子量 54 kDa。试剂盒若写“测 IL-23p19”，只抓 p19 单链；写“测 IL-23 heterodimer”，必须同时识别 p19 ...

1. 把“IL-22 单体”写进抗体表位注释 IL-22 与 IL-22BP 结合后构象改变 38 %，部分抗体识别表位被遮盖。说明书若只写“识别人 IL-22”，不提“不受 IL-22BP 干扰”，测血清会出现 30 % 假低值。让销售把抗...

1. 灵敏度 8 pg/ml：看 NCCLS EP-17 还是“零孔+2SD” 真正检出限按 EP-17 算，空白限 LOB 3.2 pg/ml，检出限 LOD 8 pg/ml，定量限 LOQ 15 pg/ml。厂家只写“8 pg/ml”却不给算法，默认按“零孔均值+2SD”...

1. 预暖台面：25 °C 恒温垫铺整个台面 IL-17 单体 15 kDa，低温孵育易聚成 45 kDa 三聚体，高端 OD 塌陷。提前把恒温垫调到 25 °C，铺满台面，试剂盒、样本、枪头盒全部放上去，30 min 后液体温度稳在 24...