蛋白种属：人源还是鼠源，决定交叉实验能否一次过 人 TIM-1 胞外区 307 aa，鼠 305 aa，同源性 58 %。做人源肾损伤模型，用鼠蛋白测血清，回收率 72 %，背景高 0.08 OD。选蛋白先看实验终点：做人源样本必...

活性单位：IU 与 pg 的换算关系不是固定 1:10 WHO 标准品 96/602 每支 5000 IU，质量标称 50 ng，理论 1 IU = 10 pg。不同表达体系糖型占比不同，CHO 源 TPO 比活 9.8 IU ng⁻¹，E.coli 源仅 6.2 IU ng⁻¹。...

双抗夹心 ELISA：抗体对决定 50 % 信号差距 IL-17F 与 IL-17A 同源性 55 %，共用受体 IL-17RC。市面抗体若用全长抗原免疫，交叉反应高达 30 %。选捕获抗体 clone 8F6，表位锁定 102–115 aa，远离 A 型同源...

样本前处理：离心速度差 500 ×g，浓度飘 15 % 血清里 FGF-21 与补体 C1q 形成 600 kDa 复合物，离心 10 min 3000 ×g 只能去掉细胞碎片，复合物仍留在上清，实测值偏高 15 %。调到 3500 ×g、4 °C、12 mi...

标准曲线不是“画”出来的，是“算”出来的 试剂盒给出的 0–2000 pg mL⁻¹ 七点标曲，靠两点拟合就能出 R²＞0.99 的假象。真做法是用四参数 Logistic 回归，把底部平台固定在 2–3 pg mL⁻¹，顶部平台落在 1...

为什么名字里带“-3”却常被当成“唯一” Galectin-3 是 galectin 家族里唯一的嵌合型成员，N 端携带胶原样重复序列，C 端保留经典的糖识别域（CRD）。这种双模块结构让它既能交联糖链，又能自身寡聚，形成...

1. 标准曲线锚点：8 点覆盖 0.05–120 ng/mL WHO 96/538 国际标准定义 1 ng = 0.027 mIU。ELISA kit 设 0.05、0.2、1、5、15、30、60、120 ng/mL 8 点，四参数拟合 R²≥0.998。去掉 0.05 ng/mL 低锚点，0....

1. 胰岛素三维钥匙：B 链 Phe-B24 决定能否插进锁孔 晶体显示受体 L1 结构域与胰岛素 B 链 Phe-B24、B25 形成三明治疏水核，突变 Phe-B24→Ser 让 KD 从 0.05 nM 飙升到 2.1 nM，信号完全丢失。细胞实验选...

1. 比活性门槛：≥3 × 10⁵ IU/mg 才够做血管生成 WHO 90/530 标准给出 PDGF-BB potency 定义，1 IU 对应 0.01 ng 纯蛋白。实测低于 2 × 10⁵ IU/mg 的批次，刺激 HUVEC 的 EC50 从 15 ng/mL 漂到 40 ng/m...

1. 标准曲线锚点：6 点覆盖 0.2–50 μg/dL CLSI EP34 建议皮质醇校准至少 5 点。实测在 0.2、1、5、15、30、50 μg/dL 呈线性，四参数拟合 R²≥0.995。去掉 0.2 μg/dL 低锚点，25 例夜班工人样本出现 0.4...

1. 全长 IL-33 定位：染色质锚定决定“何时”松绑 IL-33 缺乏经典分泌信号肽，N 端 1–75 aa 含染色质结合域，特异性识别 H2A-H2B 酸性口袋。细胞完整时，IL-33 与异染色质富集区结合，核内浓度 50–100 ng...

1. 溶解 30 s 漩涡：别让粉末壁粘损失 8% 冻干 PIGF 呈薄膜状贴壁，直接加 1 mL 无菌水，漩涡 30 s，回收率 98%；静置 5 min 再颠倒混匀，可消除肉眼不可见的蛋白聚集体。跳过二次混匀步骤，SEC-HPLC 多出...