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把 His-tag 纯化做成“即插即用”：BMR2001 的技术底牌
发表时间：2025-11-03BMR2001 是一款组氨酸标签 Ni-NTA 树脂，载量 60 mg 6×His-GFP/mL 沉降体积，动态载量 40 mg/mL（10 % 穿透）。树脂基架 6 % 高度交联琼脂糖，平均粒径 90 μm，最大耐压 0.3 MPa，可在 AKTA Pure 上 5 mL/min 流速下保持 30 cm 柱床不塌陷，适合 FPLC 放大也兼容注射器重力流。
Ni-NTA 配基密度与选择性：原子级间距
配基密度 40 μmol Ni2?/mL 胶，NTA 四齿螯合把金属嵌在琼脂糖表面，间距 1.2 nm，留给 His-tag 的同时排斥宿主蛋白。EDTA 耐受 20 mM，2 mM DTT 下 4 ℃ 24 h 镍离子泄漏 <3 %，细胞裂解液里 0.1 % Tween-20 不降低载量，可直接上样澄清后的昆虫细胞胞内组分。
实测对比：BMR2001 vs 某进口 N 品牌
裂解液：E. coli BL21 表达 28 kDa His-MBP，上样 2 mg/mL，流速 1 mL/min，5 mL 柱体积：
| 树脂 | 动态载量 (mg/mL) | 洗脱纯度 (%) | 镍泄漏 (ppm) |
|---|---|---|---|
| 进口 N 品牌 | 35 | 92 | 8 |
| BMR2001 | 40 | 95 | 2 |
| 载量高 14 %，纯度再提 3 个百分点，镍离子残留更低，下游质谱无金属干扰峰。 |
把参数写进实验记录，审稿人不再追问
“Protein was purified on His-tag Ni-NTA resin (BMR2001, 90 μm, 40 μmol Ni2?/mL, 60 mg capacity/mL) using 20 mM imidazole wash and 250 mM imidazole elution.” 一行写清粒径、配基密度、载量，方法学部分一次通过。
实验室放大技巧：从 1 mL 预装柱到 1 L 发酵液
- 柱床高径比 5:1，流速 300 cm/h，背压 <0.15 MPa，AKTA 自带压力传感器不报警。
- 上样前 0.45 μm 过滤，黏度 <4 cP，可直接泵样，省去高速离心。
- 洗脱后 50 mM EDTA 剥镍，0.5 M NaOH 30 min 再生，循环 100 次载量下降 <5 %，写进工艺规程不用每年换填料。
