Apolipoprotein D/Apo D 选购指南：把“小分子脂质快递”买得既准又省

1. 先锁定研究场景

• 神经退行模型：脑脊液 Apo D 浓度 0.2–1.5 μg/mL，选高敏 ELISA 套件，线性低端 0.05 μg/mL 才能区分组间差异。
• 代谢综合征：血清 Apo D 与 HDL 关联，需平行测胆固醇，挑可兼容 5 % 去垢剂的抗体对，避免脂浊干扰。
• 细胞上清：星形胶质细胞分泌量 5–30 ng/10? 细胞，用 Luminex 多因子组合更划算，单孔可得 50 个数据点。

2. 重组蛋白表达系统对比

3. 标签取舍：His vs 无标签

• C-端 His?：镍柱一步纯化，成本降 30 %；做晶体需切除，凝血酶 2 U/μg 4 ℃过夜，回收率 70 %。
• 无标签：Native 构象，SPR 测脂质结合无干扰，溢价 40 %，适合申报文章或体内注射。

4. 抗体对核心参数

• 捕获：克隆 2F8，识别 SRCR1 区，识别还原态，WB 1:3000，ELISA 1:500，交叉 Apo A-I <0.2 %。
• 检测：克隆 5D4，表位 SRCR2，配对信号放大 2.1 倍，生物素化后 0.5 μg/mL 即可得 450 nm OD 2.0。
• 批次间：EC?? CV ≤7 %，要求随货附原始 4-PL 曲线，缺一份直接换供应商。

5. 线性范围与灵敏度

• ELISA：0.05–10 ng/mL，LOD 0.018 ng/mL，脑脊液稀释 1:10 落中间区，误差 <5 %。
• CLIA：电化学发光，0.02–50 ng/mL，血清 5 μL 上样，脂浊标本 S/N 提升 3 倍。
• Luminex：微球 5 μg/1×10?，检测限 0.8 pg/mL，节省样本 80 %，做多因子首选。

6. 干扰与钩状

• 胆红素：40 mg/dL 信号 +6 %，HBR 阻断剂 0.25 mg/mL 可中和。
• 甘油三酯：1000 mg/dL 导致 OD -8 %，用 0.2 % 聚氧乙烯醚可拉回基线。
• 高剂量钩状：>500 ng/mL 出现前带，两步法或 1:500 预稀释规避，回收率 95–105 %。

7. 样本稳定性

• 血清：25 ℃ 24 h +10 %，4 ℃ 7 天 -5 %，-80 ℃ 24 个月 -8 %。
• 脑脊液：收集后 2 h 离心，4 ℃保存 48 h 内测完，Apo D 氧化形式 +12 %，影响抗体识别。
• 冻融：3 次循环 -6 %，6 次循环 -15 %，50 μL 分装管必备。

8. 标准品溯源

• NIBSC 无国际校准，内部自建 21/102，定值 1000 ng/mL，每批试剂盒随附溯源报告，审稿人常查。
• 企业工作品：与自建标准偏差 ≤±5 %，保留双对数回归图，现场审计需调出。

9. 价格横向对比

10. 售后与技术支持

• 活性争议：7 天内免费重测，提供原始 4-PL 曲线；偏差 >15 % 整批退款。
• 技术电话：24 h 内响应，脑脊液高背景在线帮你把封闭液换成 Casein 1 %，信号噪音降一半。