TrkB/NTRK2 技术参数：把“脑源性神经营养信号”拆成小数点后两位的硬指标

1. 分子身份与亚型

• 基因符号：NTRK2，位于人 9q21.33
• 亚型数量：TrkB-FL（838 aa）、TrkB-T1（687 aa）、TrkB-T-Shc（746 aa）
• 理论分子量：TrkB-FL 92.7 kDa，糖基化终产物 140–145 kDa；TrkB-T1 77 kDa，糖基化后 95 kDa

2. 胞外区结构坐标

• PDB：7XHE（TrkB-D5-NT-4/5复合物），分辨率 2.8 ?
• LRR 域：5 个重复，决定配体选择性；BDNF 接触面 Lys317、Asp355，突变 KD 从 1.2 nM 升至 85 nM
• 免疫球蛋白 C2 域：D4 与二聚化相关，Cys432-Cys489 二硫键断裂导致单体比例 >80 %，磷酸化信号减半

3. 糖基化图谱

• N-糖：Asn224、Asn337、Asn442、Asn514，共 4 位，占质量 18 %
• O-糖：Thr 富集区 552–560，占 2 %
• 去糖基化试验：PNGase F 处理，SDS-PAGE 降 25 kDa，BDNF 结合率 -45 %，突触生长活性几乎消失

4. 配体-受体动力学

• BDNF：SPR 实测 kon 4.1×10? M?1s?1，koff 3.2×10?3 s?1，KD 0.78 nM
• NT-4/5：kon 慢 2 倍，KD 1.6 nM
• NT-3：交叉结合弱，KD 120 nM，生理浓度下不触发磷酸化

5. 磷酸化位点量化

• Y516：Shc 结合位点，BDNF 50 ng/mL 刺激 2 min 磷酸化峰值，荧光强度基线 12 倍
• Y705：PLCγ docking，5 min 达峰，持续 60 min
• Y817：MAPK 轴激活，磷酸化比值 ≥4 视为有效信号，低于 2 判定为脱敏

6. 细胞活性窗口

• 原代海马神经元：TrkB-FL 过表达，轴突生长 50 ng/mL BDNF 24 h 增长 2.3 倍，EC?? 8 ng/mL
• SH-SY5Y-TrkB：100 ng/mL 刺激，Erk1/2 磷酸化 10 min 峰值，强度 6 倍
• Ba/F3-TrkB：细胞存活实验，BDNF 浓度 20 ng/mL 即可抑制凋亡 70 %，EC?? 3.2 ng/mL

7. 表达系统硬比对

8. 批间控制指标

• SEC-HPLC：单体 ≥95 %，二聚体 ≤3 %，聚集体 ≤2 %
• 质谱分子量：实测与理论差异 ≤0.05 %，报告附 MaxEnt1 去卷积图
• 磷酸化 CV：Y705 磷酸化强度批间 ≤8 %，附 Western 原始条带，缺一份直接退货

9. 稳定性实测

• 冻干：4 ℃ 24 个月，活性损失 ≤5 %；复溶后 4 ℃ 7 天，-12 %
• 液体：-80 ℃ 12 个月，-2 %；37 ℃ 48 h，-30 %，出现 45 kDa 降解条带
• 冻融：3 次循环，-6 %；6 次循环，-18 %，建议 50 μL 预分装

10. 检测平台参数

• ELISA：capture 4B8 / detection 6H11，LOD 18 pg/mL，线性 0.05–5 ng/mL
• AlphaLISA：受体-Fc 包被供体珠，BDNF 竞争模式，EC?? 0.15 ng/mL，信号窗口 400 倍
• Luminex：微球偶联抗体重量 ≤25 μg/1×10? 球，过量导致球聚集，CV 飙至 12 %