BAFF/BlyS/TNFSF13B 工作原理：从三聚体到B细胞存活信号的分子链式反应

1. 蛋白身份与剪切地图

• 基因符号：TNFSF13B，定位人13q32
• mRNA：1.3 kb，翻译后形成285 aa的II型跨膜前体
• 水解脱落：Arg133-Ala134被Furin样蛋白酶识别，释放可溶性BAFF（sBAFF），血清半衰期3.2 h

2. 三维组装坐标

• PDB：6V7E，分辨率2.4 ?，呈现“三叶草”同源三聚体
• 单体-单体界面：Leu205、Phe228插入疏水口袋，突变L205A使三聚体比例降至15 %，生物活性下降一个数量级
• 60位色氨酸：暴露于顶端，决定与受体BR3的第一个接触，W60A突变KD从0.7 nM升至45 nM

3. 受体层次结构

• BR3（BAFF-R）：仅结合BAFF，KD 0.5 nM，触发经典NF-κB2通路
• TACI：交叉识别APRIL，KD 15 nM，负责类别转换
• BCMA：记忆B细胞为主，KD 2 nM，维持长寿命浆细胞
• 表达量：人外周血B细胞BR3约4000受体/细胞，TACI仅800，信号分配呈现“BR3>TACI>BCMA”梯度

4. 膜微区信号启动

• 脂筏招募：三聚体BAFF结合后BR3漂移进入GM1阳性筏区，时间<30 s
• TRAF3降解：筏内cIAP1/2泛素化TRAF3，半衰期从>180 min缩短至12 min，释放NF-κB2负锁
• 非经典NF-κB2：p100→p52转化峰值在2 h，持续>8 h，决定B细胞存活窗口

5. 存活-凋亡阈值

• BAFF浓度<50 pg/mL：Bim上调，线粒体膜电位ΔΨm下降20 %，细胞进入凋亡
• 100 pg/mL：Mcl-1与Bim比值=1.2，细胞静止
• >500 pg/mL：Mcl-1上调3倍，Bim被蛋白酶体降解，存活率>90 %

6. 体内梯度实例

• 小鼠淋巴结：T区边缘BAFF 2 ng/mL，B细胞滤泡中心升至15 ng/mL，形成2倍浓度差，足以引导迁移
• 人血清：健康均值1.8 ng/mL，SLE患者均值6.4 ng/mL，梯度扩大3.5倍，B细胞自分泌放大环被激活

7. 三聚体-60聚体动态

• pH 6.5-7.4：60聚体壳状结构稳定，颗粒直径18 nm，可被冷冻电镜直接观察
• pH<6.0：壳解离，回归三聚体，活性下降60 %，解释炎症灶酸环境下信号衰减

8. 与APRIL的交叉对话

• 异源三聚体：BAFF2-APRIL1，TACI亲和力升高至KD 1 nM，类别转换IgA提升2倍
• 竞争实验：APRIL 10 ng/mL可置换50 % BAFF与TACI结合，设计抑制剂时需考虑双靶点占位

9. 常见实验干扰点

• FBS含牛BAFF：浓度50-120 pg/mL，足以激活人BR3报告细胞，实验前用BAFF免疫清除柱处理，信号背景降70 %
• 金属螯合：EDTA 2 mM破坏三聚体，活性-85 %，缓冲液改用HEPES-Ca2?体系可保持构象

10. 读数与量化技巧

• NF-κB2核转位：ImageStream成像，核/质荧光比值≥1.5定义为阳性，需计数>5000细胞才具统计力
• p52ELISA：核提取物5 μg/孔，标准曲线2-100 pg/mL，核内p52增量≥30 %视为药理学响应
• 细胞存活：Annexin V-FITC/PI双染，BAFF 500 pg/mL条件下存活率从62 %升至88 %，Z'-factor=0.52，适配高通量筛选