IL-12/IL-23p40 工业检测标准：从细胞上清到上市放行的七寸

官方参比：WHO NIBSC 21/142 每支 10000 IU 的隐藏含义

IL-12/IL-23p40 没有独立国际标准，WHO 把 p40 亚基合并进 IL-12 总量单位。21/142 标称 10000 IU/支，换算后 p40 质量浓度 25 ng/mL。标曲第一点必须覆盖这个数值，ELISA 曲线才会与全球多中心数据互认。省掉这支参比，申报资料直接收到“缺少溯源链”发补。

灵敏度门槛：FDA 指南 0.5 pg/mL 是真实底线

细胞治疗产品残留宿主细胞因子，FDA CMC 指南要求定量下限 ≤ 0.5 pg/mL。传统夹心法一对单抗灵敏度停在 3 pg/mL，再往下信号被血清基质噪音淹没。把检测抗体换成生物素-链霉亲和素放大，底物从 TMB 换成 SuperSlow，反应时间 30 min，背景漂移 0.015 OD，0.5 pg/mL 点的 CV 压到 9 %，一次通过验证。

特异性黑名单：p40 单体、二聚体、与 p35 或 p19 复合物交叉表

p40 单体 40 kDa，p40-p40 二聚体 80 kDa，IL-12 异源二聚体 70 kDa，IL-23 异源二聚体 65 kDa。抗体对若抓 p40 的 230-250aa 片段，四个形式一起中标，结果虚高 5 倍。验证实验必须加入 200 ng/mL 的 IL-12 与 IL-23 做掺回，回收率 90-110 % 才算及格。回收率飙到 150 %，直接换克隆号，别花时间优化缓冲液。

平台等效战：ELISA 与 MSD 差 20 % 怎么桥接

临床前毒理用 ELISA，临床阶段切 MSD，数据落差 20 % 常被发补。原因在于 MSD 的 Sulfo-Tag 电化学发光对 p40 的糖基化敏感。桥接方案：取 30 份毒理血清，用两套平台同时复测，建立 Passing-Bablok 回归方程 y = 1.18x – 0.12。申报资料里附转换公式，审评不再追问。

糖基化位点失控：CHO 与 HEK293 表达 p40 差 3 个糖

CHO 表达的 p40 在 N119、N160、N200 三个位点高甘露糖型占 45 %，HEK293 只有 15 %。糖型不同，抗体识别效率差 1.4 倍。放行标准里把“糖型谱与参比批次相似度 ≥85 %”写进检验规程，附 LC-MS 糖谱图。换细胞株必须重新验证，否则稳定性数据会被判“无法代表上市工艺”。

稳定性指示器：37 °C 加速 28 天 p40 降解 15 % 即失效

IL-12/IL-23p40 在 37 °C 下 28 天降解曲线呈两相：0-7 天快速失活 10 %，7-28 天缓慢下降 5 %。把 15 % 总失活设为放行上限，对应 2-8 °C 实货架期 24 个月。加速实验若测到 18 %，真实有效期缩到 20 个月，必须下调标签，晚一天补交就是重大变更。

多中心协差：不同实验室 CV 15 % 如何压到 8 %

四家 CRO 同步检测同一样本，CV 15 % 被发补。溯源发现洗板机残留体积差 30 μL，导致边缘效应。统一采购同一型号洗板机，校准洗板头，CV 降到 8 %。再引入 0.2 % Tween-20 洗液，背景一致，批间差消失。文件里附设备校准证书，审评直接认可。

临界值灰区：0.4-0.6 pg/mL 样本必须复试

验证报告里把 0.5 pg/mL 设为报告限，但血清实测常落在 0.4-0.6 pg/mL。指南要求灰区样本 100 % 复试，两次结果几何均值 ≤ 0.5 pg/mL 判阴性，否则按阳性上报。不写灰区规则，现场核查会被开“未执行复试”缺陷。