永生化人前列腺平滑肌细胞-SV40T 技术参数全景表

把关键指标钉死在数字上，实验设计才能一步到位。

基因组改造档案

• 插入片段：SV40 Large T 抗原 cDNA 2.7 kb，含内含子缺失型早期启动子
• 拷贝数：1.05 ± 0.03 copies/diploid genome（ddPCR 测定）
• 整合位点：AAVS1 安全港，chr19:55,118,789–55,120,117，无 off-target >50 bp
• 抗性筛选：Puromycin 0.5 μg/mL 7 天杀光未转染细胞，抗性基因已用 Cre-loxP 切除

细胞身份指纹

• 种属：Homo sapiens
• 组织来源：前列腺移行区，良性增生
• STR 16 位点图谱：D5S818:12,13；D13S317:11,12；其余位点与 ATCC hTERT 源株 100 % 匹配
• 支原体、细菌、真菌：三重 qPCR 阴性，检出限 10 cfu/mL

增殖动力学

• 群体倍增时间：28.4 ± 1.1 h（P10–P30，DMEM/F12 + 2 % FBS）
• 饱和密度：8.7 × 10? cells/cm2
• 传代窗口：72 h 达 80 % 融合，1 : 3 分瓶
• 极限传代：P55 仍保持 46, XY，无危机信号

表型纯度

功能指标

• 胶原凝胶收缩：10 μM 卡巴胆碱 5 min，面积缩小 62 ± 5 %
• 钙瞬变：Fluo-4 AM 峰值 F/F? 2.9 ± 0.2
• 力学生长曲线：Flexcell 张力 10 % 循环拉伸 24 h，细胞排列方向性指数 0.84

培养体系配方

• 基础：DMEM/F12，1:1
• 血清：FBS 2 %（γ 射线灭活）
• 添加：rhKGF 10 ng/mL，胰岛素 5 μg/mL，Y-27632 2 μM（前 48 h）
• 包被：0.1 % 明胶 37 °C 2 h
• 气体：37 °C，5 % CO?，可选 5 % O? 低氧延缓应激

冻存与复苏规格

• 冻存密度：5 × 10? cells/mL
• 冻存液：无血清冻存液 90 % + DMSO 10 %
• 程序降温：-1 °C/min 至 -80 °C，次日液氮
• 复苏存活率：91 ± 3 %（台盼蓝法）
• 贴壁率：6 孔板过夜 ≥ 85 %

质检放行阈值

• 无菌：14 天观察无可见菌落
• 支原体：qPCR Ct ≥ 35
• 核型：46, XY，结构变异 < 5 Mb
• 收缩功能：卡巴胆碱刺激收缩率 ≥ 60 %
• SV40T 表达：Western blot 灰度 1.0 ± 0.1（相对内参）

运输与储存

• 干冰运输：48 h 温控记录 ≤ -60 °C
• 储存期限：液氮气相 5 年
• 批次追溯：二维码 + PDF 报告云端下载