经济型细胞增殖/毒性检测试剂盒操作使用指南

细胞准备与状态评估

在进行细胞增殖/毒性检测前，细胞的状态评估至关重要。首先，确保细胞来源可靠，无支原体、细菌或真菌污染。细胞的生理状态需处于良好水平，细胞生长缓慢或出现异常形态时，检测结果会出现偏差。建议在细胞计数时，使用血细胞计数板或自动细胞计数仪，确保细胞密度在 1×103 - 1×10? cells/mL 之间。若细胞密度过低，细胞可能无法形成良好的生长环境，影响增殖结果；密度过高则可能导致细胞提前接触抑制，影响毒性评估。对于贴壁细胞，使用胰酶消化时，避免过度消化导致细胞损伤，可通过加入适量血清终止消化。细胞传代次数也需控制在 20 代以内，超过此范围，细胞生物学特性可能改变，影响实验结果。

试剂准备与使用

经济型试剂的优势

经济型细胞增殖/毒性检测试剂盒，如 CCK-8，具有成本低、灵敏度高、操作简便等优点。CCK-8 的主要成分 WST-8 是一种无色化合物，在细胞线粒体中的脱氢酶作用下还原为具有橙黄色的甲瓒染料。与传统的 MTT 法相比，CCK-8 检测法无需使用有机溶剂溶解甲瓒结晶，直接在培养板中即可测定吸光度，减少了操作步骤和潜在的细胞损伤。

试剂配制与保存

CCK-8 试剂需在使用前摇匀，避免产生气泡影响检测结果。按照试剂盒说明书，通常每 100 μL 培养基中加入 10 μL CCK-8 溶液。培养基的体积需根据细胞培养板的孔径大小进行调整，如 96 孔板一般每孔加入 100 μL 培养基和 10 μL CCK-8 溶液。操作过程中，避免试剂接触皮肤和眼睛，一旦接触立即用大量清水冲洗。

操作使用步骤

将准备好的细胞悬液加入 96 孔板，每孔 100 μL，设置 3 - 5 个复孔，以减少实验误差。在培养箱中孵育细胞，使其贴壁并开始生长。对于细胞增殖检测，一般在培养 24 - 72 小时后加入 CCK-8 溶液，孵育 1 - 4 小时。孵育时间需根据细胞类型和实验目的进行优化，例如，对于增殖较慢的细胞，可适当延长孵育时间以获得更明显的颜色变化。加入 CCK-8 溶液后，轻轻晃动培养板，使溶液均匀分布。孵育结束后，使用酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度值。同时，设立空白对照孔（仅含培养基和 CCK-8 溶液），用于扣除背景吸光度。

结果分析与判断

数据处理与计算

用专业软件或 Excel 对吸光度数据进行处理，计算细胞增殖/毒性比例，公式为：细胞增殖/毒性比例 =（实验组吸光度 - 空白对照吸光度）/（对照组吸光度 - 空白对照吸光度）×100%。绘制细胞生长曲线或毒性曲线，横轴为时间或药物浓度，纵轴为细胞增殖/毒性比例，直观呈现细胞的增殖或毒性反应。

结果解释与应用

在细胞增殖实验中，细胞增殖比例越高，说明细胞生长活性越强；在细胞毒性实验中，细胞增殖比例越低，说明药物或毒物对细胞的抑制作用越强。此结果可用于药物筛选，评估药物对细胞的增殖促进或抑制作用，指导药物研发和临床应用；还可用于细胞生物学研究，分析细胞生长特性及影响因素。

注意事项

培养环境与条件

细胞培养环境对实验结果影响重大，培养箱温度应精准维持在 37℃±0.5℃，CO?浓度保持在 5%±0.5%，相对湿度需达 95%以上。定期更换培养箱中的水槽水，保持湿度。细胞培养过程中，避免频繁开关培养箱门，减少温度和湿度波动。

检测设备校准

酶标仪是检测吸光度的关键设备，需定期校准。使用标准品进行波长校正和吸光度校准，确保检测结果准确。校准频率建议每季度至少一次。不同品牌和型号的酶标仪可能存在差异，使用前需熟悉其操作方法和性能特点。长期未使用的酶标仪，使用前需提前预热至少 30 分钟，以确保检测稳定性。

实验质量控制

为确保实验结果可靠，需设置多个复孔，一般至少 3 个，计算平均值和标准差。同时，设立阳性和阴性对照，阳性对照可使用已知具有细胞毒性或增殖促进作用的药物，验证试剂盒有效性；阴性对照使用正常培养基，评估背景吸光度和非特异性信号。实验过程中，操作人员需佩戴手套、口罩和护目镜，避免将外源物质带入细胞培养体系。