行业标准 | Activin A 活性单位溯源：从 WHO 候选标准到实验室校准的完整路径

国际单位空白：Activin A 为何至今没有 WHO IU

Activin A 属于 TGF-β 超家族，糖基化模式差异大，CHO 表达的高糖型与 E.coli 无糖型在 SMAD2 磷酸化实验中 EC50 相差 3.2 倍。WHO 生物标准化专家委员会 2018 年终止了 IU 赋值计划，理由是无法在 18 家实验室取得可合并的协同系数。结果各品牌仍以“ng/mL”上市，跨平台比较误差高达 40 %。

参考品现状：NIBSC 20/136 的赋值逻辑

NIBSC 20/136 是目前唯一提供协同校正的候选标准，采用 4 家体外生物测定平均值：SMAD2/3 荧光报告基因、FSH 抑制、P19 细胞分化、碱性磷酸酶诱导。合并后赋予 4000 U/支，扩展不确定度 18 %。想发表 SCI 级别数据，必须购买同一批次，实验结果除以 4000 换算为“relative unit (RU)”，期刊审稿人不再追问“活性定义”。

生物测定金标准：SMAD2/3 报告基因 6 点曲线

用 HEK293-SMAD2/3-luc 稳转株，6 点 3 倍稀释，范围 0.3–300 ng/mL，每孔 2 复孔，4 h 发光读数。EC50 落在 8–12 ng/mL 视为合格批次，>15 ng/mL 直接退货。该细胞系对 Activin A 专属性高，TGF-β1 需 100 ng/mL 才产生同等信号，交叉干扰 <1 %。

糖基化校正：CHO vs. E.coli 的 3.2 倍落差

同一氨基酸序列，CHO 表达后 pI 4.8，E.coli pI 6.1。SMAD2 磷酸化实验 EC50 比值 3.2。实验室若用 E.coli 蛋白做校准，再去测 CHO 药物样品，浓度会被高估 3 倍。写标准操作规程时，规定“校准品与待测样品必须同源表达”，并在报告里附 SDS-PAGE 糖染色图，期刊要求一次性通过。

内部校准品：自建 2000 U 储备库的成本拆分

买 1 支 NIBSC 20/136 4000 U，复溶后加 0.1 % BSA 分装 200 μL×100 管，–80 °C 保存。每管 40 U，可测 20 块 96 孔板。单孔校准成本 0.8 元，比商品化预标试剂盒便宜 12 倍。每季度取 1 管回测 EC50，偏移 >15 % 整批废弃，形成内部二级标准。

报告规范：MIQE 清单里必须写的 4 行字

qPCR 测 SMAD7 表达常被当作下游读数。投稿时按 MIQE 要求，在“Quantification of calibrator”栏写明：①校准品来源与批号；②活性单位 (RU)；③生物测定 EC50；④糖基化表达系统。缺一项，编辑直接拒稿。提前把四行写进补充材料，审稿周期平均缩短 7 天。

运输稳定性：干冰延误 48 h 的应急验证

夏天干冰常挥发殆尽。收货后立即 37 °C 加速 24 h，再测 SMAD2 磷酸化 EC50，偏移 <10 % 视为合格。拍照留证，偏差大直接退货，电商平台 0 成本换货，实验室零损失。