Gas6 技术参数：把“生长停滞信号”拆成可量化的硬指标

1. 分子身份卡

• 官方符号：Gas6（Growth arrest-specific 6）
• UniProt ID：Q14393
• 成熟肽长度：678 aa，前体 75 kDa，分泌后糖基化终产物 83–88 kDa
• 剪切位点：Arg429-Ala430 被弗林酶识别，缺失则膜定位下降 60 %

2. 三维结构坐标

• PDB：2C5D（Gla 域-Ca2?复合物），分辨率 1.95 ?
• Gla 域：11 个 γ-羧基谷氨酸，钙离子 7 个结合位点，KD 0.8–2 μM，决定磷脂膜吸附
• LG 域：两个层叠 β-折叠，介导 Axl 结合，热点残基 Phe414、Trp421，突变后 KD 从 0.9 nM 升至 120 nM

3. 糖基化占比

• N-糖：Asn247、Asn399、Asn562，共 3 位，占质量 12 %
• O-糖：Thr 富集区 50–55，占 3 %
• 去糖基化实验：PNGase F 处理后 SDS-PAGE 降 10 kDa，受体磷酸化信号减半，体内半衰期从 3 h 缩至 45 min

4. 受体结合常数

• Axl：SPR 实测 KD 0.9 nM，kon 2.1×10? M?1s?1，koff 1.9×10?3 s?1
• MerTK：KD 7 nM，结合速率慢 4 倍，解吸快 2 倍
• Tyro3：KD 45 nM，生理浓度下几乎不形成稳定复合

5. 生物活性定量

• Ba/F3-Axl：Gas6 浓度 50 ng/mL 时细胞增殖提高 3.5 倍，EC?? 8.2 ng/mL（0.1 nM）
• THP-1 源巨噬细胞：100 ng/mL 刺激 10 min，Axl Y702 磷酸化达峰值，荧光强度基线 8 倍
• 小鼠眼底血管渗漏模型：玻璃体注射 1 μg，48 h 渗漏面积减少 35 %，ED?? 0.3 μg

6. 表达系统对比

7. 批间一致性

• SEC-HPLC：单体峰面积 ≥95 %，二聚体 ≤3 %，聚集体 ≤2 %
• 质谱分子量：实测与理论差异 ≤0.05 %，附原始 MaxEnt1 去卷积图
• 生物活性 CV：EC?? 批间 ≤10 %，附 Ba/F3-Axl 增殖原始曲线，缺一份直接退货

8. 稳定性硬核数据

• 冻干品：4 ℃ 24 个月，活性损失 ≤5 %；复溶后 4 ℃ 7 天，-15 %
• 液体：-80 ℃ 12 个月，-3 %；37 ℃ 72 h，-25 %，出现 Gla 域降解片段 12 kDa
• 冻融：3 次循环，-8 %；6 次循环，-20 %，建议 50 μL 预分装

9. 检测平台参数

• ELISA：capture 5G7（Gla 域）/detection 7H8（LG 域），LOD 15 pg/mL，线性 0.05–3 ng/mL
• AlphaLISA：受体-Fc 包被供体珠，EC?? 0.12 ng/mL，信号窗口 500 倍，读板前避光 30 min
• MSD：电化学发光，血清稀释 1:4，回收率 92–108 %，钩状效应 >10 μg/mL 才出现

10. 关键引用标准

• ISO 13485：每批留样 3×使用量，-80 ℃封存 2 年，方便追溯
• WHO NIBSC：无正式国际标准，内部自建参考 02/2021，定值 500 ng/mL，用于校准曲线锚定