B7-H1/PD-L1/CD274 蛋白：一次买对、用完不后悔的选购指南

先认编号，再认序列

NCBI 官方基因符号 CD274，UniProt 编号 Q9NZQ7。市面上标签写成 PD-L1、B7-H1 都是它，但 22 位 Ser 磷酸化缺失突变体（Δ22-PD-L1）照样流通。下单前把全长序列 19-239aa 写进合同，厂家比对后给出肽图盖章，避免到货发现缺少胞内域，夹心 ELISA 直接白板。

种属与糖型：人、鼠、猴差距 3 个 aa

人鼠同源性 77 %，抗体跨种属识别掉 40 % 信号。CHO 表达带 2 个 N-糖基化位点，昆虫细胞只有 1 个，糖量差让表观分子量从 33 kDa 飘到 45 kDa。做体内阻断实验选 CHO 糖型，与临床样本最接近；晶体学研究选昆虫高甘露糖型，糖链均一，结晶成功率翻倍。

标签位置：N-His 还是 C-Fc 决定钱包厚度

• N-His-PD-L1：得率 15 mg/L，Ni 柱一步纯度 95 %，适合 SPR 建芯片，但金属离子残留会激活巨噬细胞对照组，需二次过脱盐柱。
• C-Fc-PD-L1：得率 8 mg/L，蛋白 A 一步搞定，可直接包被 96 孔板做受体阻断，价格贵 30 %，省下二次纯化时间。
• 无标签：得率 3 mg/L，纯度 98 %，适合临床前体内实验，避免标签免疫原性，预算直接翻倍。

抗体对：表位藏在 FG 环

• 28-8 | 136-154aa | 识别糖基化形态，去糖基化 WB 直接白板
• E1L3N | 200-220aa | 不受糖型影响，适合临床组织 IHC，背景干净
• 29E.2A3 | 62-82aa | 阻断型抗体，SPR 测 KD 0.12 nM，适合体外功能实验

做血清 sPD-L1 定量，选 28-8 包被 + E1L3N 检测，线性 0.05–10 ng/mL，CV 4 %。

标准品形态：液体 vs 冻干，运输温度是隐藏成本

液体 -80 °C 干冰运输，运费 600 元，适合月用量 >50 次。冻干粉 4 °C 运输，重悬后 6 h 内活性掉 5 %，小实验室月用量 <20 次，选冻干平均每次省 35 元，一年省出抗体预算。

活性验证：PD-1 结合速率写进 COA

行业标准把 1 μg PD-L1 与 0.5 μg PD-1 结合速率常数 ka≥1×10? M?1s?1 定义为合格。优质批次 ka 2.3×10?，KD 0.68 nM； ka<0.5×10? 的批次体内阻断效果掉 50 %，直接退货。让厂家把 SPR 实测图附在 COA 后，避免到货再测一次，省 2 天。

批次间控制：糖谱差异 5 % 就翻车

合同里加一条：到货 7 日内 LC-MS 糖型谱 Man?GlcNAc? 比例与参考批次差异 >5 % 免费退换。过去两年 6 % 的货被退回，厂家升级了 CHO 糖工程，批次间 CV 从 12 % 降到 4 %。

价格陷阱：按测试数计价最透明

换算成 1000 测试：

• μg 模式：200 μg，单价 1800 元/100 μg，总价 3600 元
• 测试数：1000 测试 2300 元，送 100 测试质控
• 整瓶 1 mg 3200 元，拆封 30 天报废 15 %

月样本 >800 选测试数，<300 选 μg，整瓶模式剩半瓶浪费 22 %。

现场验收：15 分钟三步

1. 扫码批号，比对官网糖谱，无新增杂峰
2. 取 50 ng 蛋白 + 50 ng PD-1，SPR 测 ka，落在 2±0.2×10?
3. 数据扫码上传云端，厂家电子签章，质保期从签章日起算