IGFBP-4 选购指南：把“抑制 or 增效”IGF 的开关一次买对

26 kDa 的“IGF 搬运工”，浓度一样，活性可以相反，选错批次实验直接反向。

1. 磷酸化状态：Ser101 磷酸化决定抑制强度

• 去磷酸化 IGFBP-4 对 IGF-1 亲和力 KD≈0.5 nM，磷酸化后升到 0.05 nM，抑制活性翻倍。
• 厂家只写“活性”不写“磷酸化率”，索要 Phos-tag SDS-PAGE 图，磷酸化条带灰度≥40 % 才签单，低于 20 % 的批次 IGF-1 增殖实验 EC50 右移 3 倍。

2. 糖基化差异：真核 vs 原核差 1.5 倍亲和力

• CHO 表达 IGFBP-4 带 2 条 N-糖链，水化半径大，血清半衰期 2 h；E.coli 无糖基化，半衰期 20 min，细胞实验要补 10 倍量才能持平。
• 做活体成像优先选 CHO 真核 版本，单价贵 30 %，用量省 70 %，总账更便宜。

3. 标签选择：N-His? 遮不住 IGF 槽，C-His? 遮不住纯化

• N 端 His? 距离 IGF 结合槽 25 ?，基本无空间位阻；C 端 His? 靠近 L 结构域，金属螯合时咪唑会拉扯 Arg62，活性回收 75 %。
• 无标签版本单价高 15 %，比活性 200 kIU/mg，做体外酶切免去除标签，省 2 h 工艺。

4. 缓冲液盐度：150 mM NaCl 是防聚体底线

• 低盐 < 100 mM 时，蛋白靠正电荷互斥，Native-PAGE 出现 52 kDa 二聚体，IGF-1 结合容量掉 30 %。
• 出厂配方 PBS+150 mM NaCl+10 % 海藻糖 能把聚体压到 < 3 %，?80 °C 一年零损失。

5. 内毒素：0.01 EU/μg 以下才能谈心肌保护

• 0.1 EU/μg 的 IGFBP-4 加入原代心肌细胞 24 h，TNF-α 背景升到 150 pg/ml，直接把 IGF-1 促存活效应掩盖。
• 要求 动态 LAL 曲线，上升斜率 > 0.02 OD·min?1 就退货，0.01 EU/μg 以下才签收。

6. 冻干 vs 液体：冻干活性 +25 %，运费 ?50 %

• 液体 ?80 °C 保存 12 个月活性掉 20 %，干冰运费每公斤 ￥200；冻干品 25 °C 避光 24 个月零损失，常温运输。
• 复溶用 15 °C 水浴 90 s，立即冰浴，IGF-1 增殖实验 EC50 与新鲜液体平行，误差 < 5 %。

7. 批次日检：IGF-1 增殖快速标定

• 96 孔板，IGF-1 20 ng/ml + IGFBP-4 200 ng/ml，HUVEC 增殖率应降到基底水平，再加 5 μg/ml IGFBP-4 抗体，增殖率拉回 90 %，验证特异性。
• 偏差 > 15 % 立即启动售后，免费换新，实验节奏不停。