JE/MCP-1/CCL2 技术参数速查：把 ED50、内毒素、标签位置一次对齐

8 kDa 的趋化因子，参数表上差一行，Transwell 就全军覆没。

1. ED50 单位换算： ng/ml 与 IU 的隐形鸿沟

• WHO 94/502 标准定义 1000 IU ≈ 0.47 ng，厂家写 ED50=20 ng/ml 看似很纯，换算后只有 23 IU/μg，低于 200 IU/μg 的批次做趋化经常浓度拉到 500 ng/ml 才勉强及格。
• 索要 IU 换算页，把 ED50 直接除以 0.47，再乘 1000，低于 150 IU/μg 直接淘汰，省得后续加十倍量拖垮预算。

2. 内毒素批次图：≤0.01 EU/μg 是活体底线

• 0.1 EU/μg 的 CCL2 刺激 PBMC 4 h，IL-6 背景飙 300 pg/ml，会把趋化实验的迁移率从 35 % 压到 18 %。
• 要求 COA 附 LAL 动态显色图，不是只给数值；曲线上升斜率 > 0.05 OD·min?1 就提示微量热源，批次拒收。

3. 标签位置：N 端 SUMO 让活性掉 40 %

• CCL2 的 N 端第一个 Tyr 是受体结合钥匙，带 6×His 或 SUMO 后，空间位阻把 CC 基序推高 0.8 ?，ED50 从 20 ng 升到 120 ng。
• 选 C 端标签 或 无标签 版本，比活性可维持 200 IU/μg 以上，价格只贵 12 %，做活体成像不心疼。

4. 缓冲液盐浓度：50 mM NaCl 是聚体分水岭

• 低于 50 mM 时，蛋白靠自身正电荷互斥，形成 24 kDa 三聚体，Native-PAGE 能看到模糊拖尾。
• 出厂缓冲液 PBS+150 mM NaCl+10 % 海藻糖 能把聚体压到 < 2 %，冻干复溶后 Native 胶一条带，趋化迁移 CV<5 %。

5. 冻干 vs 液体：冻干活性+5 %，价格?20 %

• 液体 ?80 °C 保存 12 个月活性掉 15 %，冻干品 25 °C 避光 12 个月零损失，复溶后 4 °C 一周仍维持 95 %。
• 冻干加 0.5 % 甘露醇做骨架，复溶时 15 °C 水浴 90 s 无泡，马上冰浴，趋化结果与新鲜液体平行，误差 < 3 %。

6. 荧光标记：Alexa 488 标记度 1.2 最稳

• 标记度 > 2 时，Lys34 和 Lys58 双双被占，CCR2 结合面电荷翻转，ED50 直接翻 3 倍。
• 要求 COA 写 标记度 1.0–1.3，并附 质谱 MALDI 图谱，多一个标记峰就退货，活体成像信背比维持 10:1。

7. 比活性日检：Transwell 快速标定法

• 5 μm 孔径 Transwell，10? THP-1 细胞，下室 200 μl 含 50 ng/ml CCL2，37 °C 90 min，迁移率 35 % 对应 200 IU/μg。
• 迁移率 < 25 % 即活性跳水，立即用同批次标准品回标，偏差 > 20 % 启动售后，免费换新。