Arginase 1/ARG1 技术参数：把“尿素循环关健酶”量化成可对比指标

比活性：≥ 300 U mg?1 是体外定量底线

一单位定义为 37 °C 每分钟催化生成 1 μmol 尿素。CHO 源重组人 ARG1 比活 350 U mg?1，E.coli 源 220 U mg?1，差 37 %。做细胞裂解液标曲，高比活版本 10 ng 即可上线，低比活需 30 ng，背景尿素干扰同步放大。合同写明“≥ 300 U mg?1”，到货复测偏差＞10 % 直接退货，省得重做整板。

Km 值：37 °C 下 5 mM 是平台，温度降 5 °C 升 1.4 倍

标准缓冲液 50 mM Tris-HCl pH 9.5，37 °C 测得 Km 5.2 mM；温度降到 32 °C，Km 升到 7.3 mM，表观活性掉 18 %。实验室恒温金属浴年度校准±0.2 °C，写 SOP 把反应温度锁死 37 ℃，每块板带 QC 样本，Km 漂移＞0.3 mM 整批数据作废，文章审稿人不会再问“温度差异”。

最适 pH：0.1 单位偏移让 Vmax 掉 8 %

pH 9.5 时 Vmax 100 %；pH 9.4 降到 92 %，pH 9.6 升到 102 %，看似平坦，酶标仪 0.05 分辨率根本读不出。用 1 M NaOH 调缓冲液，每批用 pH 计三点校准，控制在 9.50±0.05，板间 CV 从 7 % 压到 3 %，灰区样本无需复测。

金属离子：Mn2? 浓度差 0.5 mM，活性差 12 %

ARG1 需 Mn2? 作辅因子，最佳 2 mM；降到 1.5 mM 活性掉 12 %，升到 4 mM 因离子强度过高同样掉 10 %。配制反应液时 MnCl?·4H?O 称量误差±1 mg 就能跑出两条量效曲线。用 100 mM 母液分装 1 mL/管，–20 °C 冻存，每月新配，把离子误差锁进 2 % 以内。

消光系数：尿素用 430 nm 显色，ε = 0.13 mM?1 cm?1

尿素与对二甲氨基苯甲醛显色，30 % 盐酸条件下 430 nm 吸光，ε = 0.13 mM?1 cm?1。比色皿光径 1 cm，读数 0.05–1.2 OD 线性最好；96 孔板 200 μL 液深 0.7 cm，ε 需乘以 0.7，计算时写成公式贴 SOP，新手也不会把活性算错 30 %。

聚体控制：SEC-HPLC 二聚体＜2 % 才稳

还原 SDS-PAGE 25 kDa 单条带，SEC-HPLC 可能藏 5 % 50 kDa 二聚体。二聚体与单体催化效率相同，但体内半衰期短 40 %。合同要求“二聚体＜2 %”，到货 215 nm 面积归一化，超标就退货，动物实验剂量不用再额外加 20 % 富余量。

冻干保护：蔗糖 5 % + 0.005 % Tween-20，25 °C 加速 4 周活性掉＜3 %

冻干前加 5 % 蔗糖形成玻璃态，0.005 % Tween-20 抑制界面变性。25 °C 加速 4 周，比活偏移 2 %，不加保护剂偏移 18 %。发文章做长期稳定性，直接引用 ICH Q1A 条件，审稿人不再要求补 6 个月数据。

储存浓度：0.5 mg mL?1 是吸附红线

低于 0.5 mg mL?1，ARG1 正电荷吸附管壁，24 h 损失 20 %。工作液先配到 1 mg mL?1，–80 °C 分装 50 μL，再稀释到 100 μg mL?1 时加 0.1 % HSA 做载体，回收率拉回 97 %。写 SOP 把“加 HSA”写成强制步骤，新人也能一次做对。