CCL3/MIP-1α ELISA 试剂盒：把 7 个关键参数一次看懂

标准曲线不是“画”出来的，是“算”出来的

试剂盒给出的 0–2000 pg mL?1 七点标曲，靠两点拟合就能出 R2＞0.99 的假象。真做法是用四参数 Logistic 回归，把底部平台固定在 2–3 pg mL?1，顶部平台落在 1800–1950 pg mL?1，中间 IC50 偏移不超过 8 %。采购前让供应商提供原始 OD 值文件，现场跑一遍复核，能筛掉 30 % 虚标灵敏度的批次。

灵敏度与检测下限：别被“＜1 pg mL?1”广告词忽悠

灵敏度（MDD）= 20 个零孔均值 + 2×SD，真正可重复检出的最低浓度是 3.2 pg mL?1。低于这个值，CV 会跳到 18 % 以上，临床血清里微量的 CCL3 根本分不清是信号还是噪声。看质检报告时，要求附 6 板独立批次数据，CV 必须 ≤ 10 %，否则低价盒省下的钱会在重复实验里翻倍烧掉。

样本类型兼容性：EDTA 血浆与细胞上清差 1.4 倍

CCL3 带大量正电荷，会吸附到采血管壁。肝素抗凝里回收率 92 %，EDTA 只有 66 %，因为 EDTA 螯合了蛋白表面 Ca2?，改变构象。细胞上清里胎牛血清含牛源 CCL3，交叉反应率 3–5 %，必须做稀释线性实验，1:2、1:4、1:8 回收率落在 80–120 % 才算合格。选购时直接问厂家要“不同基质添加实验”原始数据，省得自己再花两周验证。

抗体对表位：单抗捕获 + 多抗检测 ≠ 万能

捕获抗体克隆 10F7 识别 29–38 aa，检测抗体 clone 12F8 识别 62–71 aa，两段表位在活性分子表面暴露度最高。若样本里出现天然截短体（1–66 aa），检测信号直接掉 50 %。做炎症模型研究最好选“双多抗”方案，捕获与检测均用多抗，覆盖 10–70 aa，全长与截短体一起抓，信号丢失＜10 %。

批间差：把“三批次报告”拆成 12 组读数

厂家只给三批标曲斜率差异 ≤ 5 %，却不提板内板间双重 CV。真做法是把三批试剂盒各抽 4 板，拆成 12 组，零孔 OD 分布 0.045–0.065 属于可接受，超过 0.07 说明 HRP 底物批号混用，后期灰区样本会被误判阳性。现场抽检验收时，带上自己实验室的 30 份旧样本，看三批定量值偏差，能直接淘汰“伪高重现”批次。

回收率与稀释线性：一步法还是两步法

血清原液 600 pg mL?1，1:2、1:4、1:8 稀释后理论值 300、150、75 pg mL?1，实测值落在 85–115 % 区间算合格。两步法稀释（先 1:2 再上板）比一步法（直接上样 1:8）平均高 8 %，因为减少了基质效应。试剂盒说明书只写“推荐 1:2 稀释”，却不给稀释线性图，要求厂家补原始数据，能省掉自己摸索的 48 孔预实验。

酶标板材质：高吸附≠高信号

CCL3 分子量 8.7 kDa，太小，普通高吸附板（polystyrene）表面疏水位点会把蛋白“拉平”，表位被埋。中高端盒用“中结合”板，表面带少量羧基，让蛋白侧向吸附，表位保留度提高 20 %，信噪比直接提升 0.2 OD。价格只差 0.8 元/板，长期实验算起来比加大抗体浓度划算。

稳定性暗坑：37 °C 加速 7 天 ≠ 4 °C 真实效期

厂家宣称 4 °C 可存 18 个月，依据是 37 °C 加速 7 天损失＜10 %。CCL3 标准品里含 0.02 % Tween-20，高温下会氧化生成过氧化物，把蛋白 Met-46 氧化成亚砜，抗体识别力下降 15 %。真实稳定性要看 4 °C 留样 6 个月，偏差 ≤ 8 % 才靠谱。签约前索要 4 °C 长期留样报告，能避免项目做到一半标准品掉线。

价格公式：把“元/pg”算到单次实验

一盒 96 孔，标价 2800 元，看起来比 3200 元的便宜。前者标曲占 16 孔，只能测 80 份样本；后者提供 8 孔标曲，可测 88 份。换算到每 pg 信号成本，前者 0.18 元/pg，后者 0.15 元/pg。再考虑重复实验，便宜盒批间差大，重做 10 % 样本，实际成本反涨 12 %。把“元/pg”与“重做率”一起算，才能选出真便宜。

现场验收：带 3 份已知浓度样本就够

• 低值 25 pg mL?1：CV ≤ 15 %，偏差 ≤ 20 %
• 中值 300 pg mL?1：CV ≤ 8 %，偏差 ≤ 10 %
• 高值 1200 pg mL?1：CV ≤ 5 %，偏差 ≤ 8 %

一次性跑完 3 点，就能画出“实验室接受曲线”，比看厂商 COA 更直接。任何一点超标，直接整批退货，省得后续项目数据被审稿人质疑。