TSLP ELISA 试剂盒：选购时把技术指标翻译成可复现的数据

1. 认准校准品溯源号

TSLP 浓度目前没有国际单位制，NIBSC 代码 14/210 是唯一可供回溯的重组人标准。试剂盒把 1 μg 定成 1 000 AU，报告单里能查到批次与 NIBSC 校准曲线斜率，就能直接和别人的 ng/mL 做横向比较。缺这条编号，文章审稿阶段会被要求补平行实验，花一次试剂钱买两次工作量。

2. 检测下限不是写得越低越牛

血清 TSLP 基线 5–20 pg/mL，哮喘急性期滑到 100 pg/mL。厂商写 0.5 pg/mL 检出限，用的是缓冲液背景，真实血清里嗜酸颗粒富含嗜盐蛋白，基质效应把低段信号抬 3 倍。选 2 pg/mL 实用检出限、20–2 000 pg/mL 动态范围的款，一次稀释就能落在线性区，省掉 1:5 预稀释步骤，CV 立刻好看。

3. 抗体对决定亚型覆盖

人 TSLP 有长链 159 aa 与短链 60 aa 两种，短链缺 exon 3。抗体抓位点在 30–45 区可双收，落在 110–125 只能测长链。过敏性鼻炎研究里短链占比 15%，漏掉直接低估总量。索要抗体抗原位点图，选覆盖 30–45 与 90–110 的双单抗体系，数据才完整。

4. 预包被板还是现配板

预包被单抗的板子单价贵 35%，开袋 1 h 内必须用完，适合样本 ≤40 个。样本上百就选现配板：包被 4 °C 过夜，封闭 2 h，成本降 30%。包被缓冲液用 0.05 M 碳酸盐 pH 9.6，抗体 1 μg/mL，每孔 100 μL，封闭用 1% BSA+2% 蔗糖，板内 CV 压到 4% 以下。

5. 读数时间与信号衰减

显色 TMB 体系 650 nm 动力学读数，5 min 内线性增长，10 min 后斜率掉 20%。设定 3 min 加终止液，每块板固定 8 min 读数窗口，能把批间斜率差控制在 ±0.02 AU。用 450 nm 终点法，显色 15 min 立即终止，延迟 3 min 信号掉 8%，浓度差 6 pg/mL 就能误判。

6. 血清还是血浆，抗凝剂有坑

肝素与 TSLP 带正电区结合，回收率掉 25%；EDTA 螯合钙，抗体表位稳定，回收率 95%。选 EDTA 血浆，采血后 2 h 内离心 1 500 g 10 min，分装-80 °C，冻融一次损失 <5%。血清需室温凝血 30 min，离心同上，但纤维蛋白原残留会抬背景 OD 0.02，需 1:2 预稀释。

7. 高剂量钩状效应现场排查

哮喘重症血清 TSLP 可冲到 1 500 pg/mL，超过上限会出现钩状假低值。每批样本随机抽 1 个做 1:4 稀释，回算值在原值 ±10% 即安全。若差值 >20%，说明高剂量抑制，报告里标注“稀释线性校正”，审稿人不再追问。

8. 批间差验收三步走

新批次到货先用旧批次做 20 例随机样本平行检测，Passing-Bablok 回归斜率 0.9–1.1，截距 ±2 pg/mL 算合格。再把高、中、低三点质控各跑 6 孔，CV ≤8%，偏差 ≤5%。把验收截屏附在实验记录，审计追踪直接亮证据。

9. 环保试剂与废液处理

TMB 底物含 0.01% 过氧化氢，终止液 2 M 硫酸，混合后 pH <2，按酸性废液收集，用碳酸氢钠中和到 pH 7 再倒掉。抗体标准含 0.05% Proclin 300，属低毒防腐剂，可直接下水道冲 10 倍体积。板子用 70% 乙醇泡 30 min 可回收，但读数窗口会随重复次数漂移，最多再用两次。

10. 价格梯度与返利套路

R&D 官方报价 3 200 元/96 孔，高校代理 2 600 元，返 200 元京东卡。Abcam 标价 2 800 元，发文章引用返 300 元抗体券，适合后续实验。国产芯硅谷 1 400 元，抗体位点公开，NIBSC 溯源完整，性价比最高，但批间差 12%，需要多买 10% kit 做备用。