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IL-17A 选购指南:避开高浓度失效与批次漂移的隐形坑

发表时间:2025-09-18

活性单位迷雾:WHO 尚未给出国际单位

IL-17A 没有 WHO 国际参比品,目录写“10 μg 约 1×10? units”是厂商内部标定。内部标定用 TF-1 细胞增殖法,ED50 0.2 ng/mL,换算成单元活性 5×10? units/mg。不同品牌 ED50 从 0.05-0.8 ng/mL 浮动,活性差 16 倍。选购前让销售提供 TF-1 实验原始曲线,ED50>0.5 ng/mL 直接淘汰,省得回去自己再测。

载体蛋白陷阱:BSA 浓度 0.1 % 就能激活人巨噬细胞

人源 IL-17A 溶液常加 0.1 % BSA 防吸附,BSA 残留肽段可激活 TLR2,IL-6 背景飙到 500 pg/mL。做原代巨噬细胞实验,选“无载体”冻干款,用 10 mM HCl + 0.1 % 海藻糖复溶,吸附损失 <5 %。无载体价格贵 25 %,背景降一个量级,算下来比多做一组空白对照便宜。

内毒素灰区:0.01 EU/μg 是体内实验红线

IL-17A 诱导小鼠中性粒细胞浸润,阈值 1 μg/只。内毒素 0.1 EU/μg 时,小鼠 2 h 体温升高 1 ℃,IL-6 血清水平窜到 2 ng/mL,完全掩盖 IL-17A 效应。要求厂商用重组 C 因子法报内毒素,限值 0.01 EU/μg,比凝胶法贵 30 美元,做一次省一群小鼠。

糖型差异:CHO vs E.coli 半衰期差 6 小时

CHO 表达 IL-17A 在 N68 位带 60 % 复杂型糖,小鼠半衰期 2.8 h;E.coli 无糖基化版本 1.2 h。做急性炎症模型选无糖版本,成本低 40 %;做持续阻断实验选糖基化版,减少频繁补针。目录不写糖型,直接问销售要 LC-MS 糖谱,给不出就换品牌。

批次漂移:ED50 差异 2 倍算正常,4 倍就退货

同一品牌 5 批次 ED50 在 0.15-0.3 ng/mL 浮动,内部质控允许 2 倍。一批突然跳到 0.6 ng/mL,活性掉 4 倍,TF-1 细胞状态没变,问题出在蛋白折叠。把该批次编号写进采购黑名单,要求厂商提供 10 μg 免费替换,同时附带 SEC-HPLC 聚集体报告,聚集体 >5 % 直接报废。

运输温度盲区:干冰运输导致蛋白表面冻伤

IL-17A 冻干粉走干冰,温度 –78 ℃,蛋白表面水分子升华,形成玻璃态微裂纹,复溶后出现 5 % 聚集体。选常温运输冻干款,聚集体 <1 %,活性无差异。急着要货选干冰,到货立即测 SEC-HPLC,聚集体 >3 % 就让厂商签赔偿协议。

包装规格算法:50 μg 小包装最省

IL-17A 体外 EC50 5 ng/mL,96 孔板每孔 100 μL,只需 0.5 ng,一整板 50 ng。50 μg 小包装可跑 1000 孔,价格 180 美元,比 500 μg 大包装单价贵 20 %,但大包装复溶后 4 ℃只能放 7 天,用不完就是浪费。按实验通量下单,小包装反而便宜。

受体结合验证:HEK293-IL-17RA 报告基因细胞系

目录写“活性已验证”,不提供原始数据。自己买 HEK293-IL-17RA-NF-κB-luc 报告细胞,ED80 浓度 2 ng/mL,厂商批次若需 10 ng/mL 才到平台,说明亲和力掉 5 倍。把报告细胞当收货质检工具,一次检测成本 25 美元,比做动物实验快 10 倍。

售后响应红线:48 h 内提供 COA 与生物活性图

下单前把“48 小时内提供 COA、SEC-HPLC、TF-1 ED50”三件套写进合同,超时扣 10 % 货款。厂商普遍能答应,真超时邮件催一次,附件当天就到。没写进合同,催三次才给,实验窗口已被耽误两周。

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