OPN 选购指南：从科研到诊断的避坑路线图

1. 认清亚型：全长 vs 剪切 vs 磷酸化

• 全长 OPN-a：314 aa，分子量 ~33 kDa，含 1 个 RGD 整合素结合域 + 2 个肝素结合区；血清中半衰期 15 min，适合短期刺激实验。
• 剪切型 OPN-b：凝血酶 Thr170–Arg171 切断，生成 24 kDa N 端 + 9 kDa C 端；N 端片段与 α4β1 亲和力提升 4 倍，肿瘤迁移模型优先选。
• 磷酸化位点：Ser/Thr 最多 36 处，酪蛋白激酶 II 主导；磷酸化程度影响 CD44 结合，科研级需注明 “phosphorylated” 标签，ELISA 检测用 3D3 抗体识别 p-Ser283。

2. 表达系统决定糖谱

• HEK293：真型糖基化，唾液酸化占 28 %，与血清天然形式接近；价格 ￥8 k/mg，用于细胞黏附实验背景低。
• E. coli：无糖基，分子量 29 kDa，溶解度 10 mg/mL；适合晶体学或抗体制备，动物注射需加弗氏佐剂。
• 昆虫 High Five：核心岩藻糖缺失，免疫原性低，疫苗佐剂研究常用；内毒素 <0.1 EU/μg，可直接用于小鼠。

3. 标签选择：His 还是 Fc？

• C-端 6×His：Ni 柱一步纯度 >95 %，金属螯合不影响 RGD 构象；但 280 nm 吸收低，定量需用 BCA。
• hFc 融合：二聚体形式，分子量 90 kDa，体内半衰期延长至 6 h；做中和实验时记得加抗-Fc 磁珠去除背景。
• 无标签：凝血酶切除后留 3 aa（Gly-Ser-His），质谱可追踪；适合临床前研究，避免免疫原性争议。

4. 纯度与杂质红线

• SDS-PAGE 单带 ≥98 %：银染无杂带；出现 28 kDa 条带说明细菌宿主 OmpC 污染，会激活 TLR4。
• HPLC-SEC：主峰面积 ≥97 %，聚集体 <1 %；聚集体过高会诱导巨噬细胞非特异性 TNF-α 释放。
• 宿主蛋白残留：<10 ppm（ELISA 夹心法）；高于此值，小鼠 24 h 血清 IL-6 升高 3 倍，数据不可信。

5. 活性验证金标准

• 细胞黏附：MC3T3-E1 细胞，RGD 依赖，ED50 0.15 μg/mL；加 GRGDSP 肽 50 μg/mL 可阻断 95 %。
• 趋化迁移：THP-1 细胞，Transwell 5 μm，ED50 0.8 μg/mL；与 MCP-1 联用指数叠加至 2.2 倍。
• CD44 结合：表面等离子共振测得 Kd 48 nM；突变 D192A 亲和力下降 20 倍，用作阴性对照。

6. 包装规格与溶解方案

• 小试：100 μg/支，加 1 mL 无菌 10 mM 乙酸（pH 4.0），瞬时溶解，4 °C 存放 1 周；中性 PBS 易聚集。
• 中试：1 mg 冻干饼，附带 10 mL 缓冲液交换袋；使用时 0.22 μm 负压过滤，可直接连生物反应器。
• 临床级：10 mg 预充西林，带 RFID 温度芯片；?20 °C 运输，断链 30 min 自动报警，符合 GSP 规范。

7. 价格与单位换算

• HEK 真型：￥8 k/mg，1 mg = 3.3×10? 活性单位（以 MC3T3 黏附 ED50 计算）；折算 0.24 元/单位。
• 大肠杆菌：￥2 k/mg，比活性高 1.6 倍，1 mg = 5.3×10? 单位，折算 0.038 元/单位；做抗体制备最划算。
• 定制磷酸化：体外 PKA 反应，每个位点加价 20 %，至少 3 个位点起订；需额外 5 天 HPLC 纯化。

8. 售后与技术支持

• 活性争议：24 h 提供原始黏附实验原始 OD570 读数，含阳性对照玻连蛋白批次号。
• 换货条款：运输超温 8 °C 以上拍照，48 h 内补发；旧货由供应商委托生物危废处理，实验室零负担。
• 应用资料：赠送 30 页 PDF，含 6 种细胞系黏附条件、包被浓度矩阵，直接复制即可实验。