人PD-1 ELISA试剂盒技术参数：从0.024 ng/mL到4000 pg的八阶跨度一次说清

灵敏度双阈值：分析灵敏度0.024 ng/mL只是门票，功能灵敏度0.05 ng/mL才决定能否区分低表达

分析灵敏度按2×SD零孔计算，可写进标书。功能灵敏度是让20% CV对应的实测浓度，试剂盒用高亲和兔单抗（Ka≥2.1×1011 L/mol）把功能灵敏度压到0.05 ng/mL，早期免疫治疗基线样本不会被误判为"0"。验收时连续测3批，低质控0.08 ng/mL CV必须＜20%，否则退货。

检测跨度：0.05–4000 pg/mL靠什么实现不稀释

抗体对采用"兔单抗捕获+小鼠单抗检测"双表位设计，表位分别位于CRD1与CRD2，避开糖基化位点，平台区推到4000 pg/mL。8点定标，最高浓度回收率95–105%，省去手工稀释，一块板同时测血清与细胞上清，省2小时实验时间。

精密度拆解：批内CV≤4%，批间CV≤7%的底层控制

捕获抗体包被浓度固定在1.5 μg/mL，CV来自板间差异；检测抗体HRP偶联后活性每批差异≤3%；标准品用NIBSC 15/266溯源，冻干批间赋值差异≤2%。三误差叠加后批间CV仍能≤7%，满足CAP室间质评±20%容忍区间。

交叉反应：PD-L1、PD-L2、CD28、CTLA-4全部＜0.1%

抗体制备阶段用PD-L1-Fc嵌合蛋白做负向吸附，ELISA验证5000 pg/mL PD-L1回算值＜0.05 ng/mL。临床常见高可溶性PD-L1（≥1000 pg/mL）样本，PD-1结果不会假性抬高，避免免疫疗效评估出现"假低表达"。

回收率与稀释线性：1∶2、1∶4、1∶8稀释r≥0.999

细胞上清通常高表达，需稀释。用1%BSA PBS做稀释液，蛋白浓度维持在15 mg/mL，防止非特异吸附。回收率区间90–110%，线性回归r≥0.999，确保流式验证高值样本与ELISA数值对齐。

钩状效应安全区：＞50000 pg/mL才出现假低值

双抗体夹心法钩状点由捕获/检测比例决定。试剂盒把捕获量降到0.8 μg/mL，检测抗体1∶2000，钩状点推到50000 pg/mL，高于临床可见峰值。验收时加标30000 pg/mL，回算值应在靶值±10%，杜绝高值样本被误判。

校准品不确定度：k=2时2.8%如何向下传导

校准品赋值1000 pg/mL，扩展不确定度28 pg/mL。按误差传递公式，样本1000 pg/mL时合成不确定度30 pg/mL，k=2报告为1000±60 pg/mL，医生一眼看出测量可信度，避免把60 pg/mL波动当成免疫应答变化。

稳定性条款：4℃14个月、?20℃24个月的底层配方

捕获抗体包被板用10%海藻糖+0.5%甘露醇做冻干保护，37℃加速7天活性损失＜3%，折算4℃14个月。酶标抗体加0.02%Proclin 300+0.1%BSA，?20℃反复冻融5次活性损失＜5%。实验室收到新批号先跑0标准，OD掉值＞8%直接退货。

云端曲线追溯：每块板自动生成二维码

小程序扫码上传8点定标OD，云端实时计算斜率、EC50、r值。EC50偏移＞5%系统推送"批间漂移"警告，实验员可提前更换试剂，避免当天百份样本重测。