大鼠 IL-6 ELISA 选购指南：把 7 个暗参数一次看懂，不再为“测不准”花冤枉钱

Rat IL-6 ELISA Kit 标价从 1400 到 3800 元落差两倍，价差背后藏着抗体表位、基质干扰、Hook 拐点三条暗线。下面拆成 7 张打分表，每表给出可量化的合格线，拿到 COA 直接对号入座，10 min 筛掉 80 % 的“美丽废物”。

1. 抗体表位：锁定 29–212 aa，避开信号肽与可变区

IL-6 前体 1–28 aa 为信号肽，分泌后切除；183–212 aa 为受体结合核心。

核对句：说明书“Immunogen”写 “recombinant rat IL-6 (Pro29–Met212)” 或 “mature region 29–212” 才抓得到分泌型；出现 “1–212 full length” 把胞内前体算进来，肝匀浆结果虚高 25 %。

2. 功能灵敏度：7 pg/mL 只是“理论值”

厂商用 2×SD 空白得出 7 pg/mL，实际血浆里 α2-巨球蛋白-IL-6 复合物会把背景抬高 3 倍。

实测：

• 取 6 份 SD 大鼠基础血浆，添加 7、15、30 pg/mL 标准品，回收 80–120 % 的最低浓度即为“功能灵敏度”。
• 功能灵敏度 ≤15 pg/mL 的批次才能测正常大鼠；20 pg/mL 以上只能测 LPS 或手术炎症模型。

3. Hook 上限：1200 pg/mL 是红线

CLP 脓毒症 6 h 血浆 IL-6 可冲到 800–1000 pg/mL。

关键数：说明书“Upper Hook” ≥1200 pg/mL，抗体亲和足够，不会出现高剂量假低；仅写 600 pg/mL 的盒子，脓毒症样本必须预稀释 1:2，否则读数比真值低 35 %。

4. 基质干扰与最小需求稀释度（MRD）

大鼠血清含纤维蛋白原，能与 IL-6 形成 1:1 复合物，导致检测值偏低。

快速验证：

• 同一血清 1:2、1:5、1:10 稀释，测得值×稀释倍数后偏差 <10 % 的最小稀释比即为 MRD。
• MRD ≤1:5 说明稀释液里已含 0.5 M NaCl + 0.05 % Tween-20，可解离复合物；MRD 1:10 以上浪费样本，增加误差。

5. 交叉反应：IL-6 R、CNTF、LIF 混进来多少？

IL-6 与 CNTF 同源 18 %，抗体稍不纯就交叉。

底线数据：说明书“Cross-reactivity” 一栏 CNTF ≤0.1 %、LIF ≤0.05 % 才算合格；出现 1 % 交叉的盒子，测 50 pg/mL IL-6 时，若同时存在 500 pg/mL CNTF，结果虚高 5 pg/mL，误差 10 %。

6. 加速稳定性：37 ℃ 7 天偏差 <8 %

IL-6 含 2 个游离 Cys，氧化后二聚体增加，ED50 漂移。

核对：COA“Accelerated stability” 37 ℃ 7 天，标准曲线中点偏差 <8 %；无此项数据的批次，–80 ℃ 分装 3 个月后灵敏度下降 18 %。

7. 单孔成本与售后暗条款

96T 盒子标价 2600 元，拆 80 可测孔，单孔 32 元； competitor 2×96T 标价 4400 元，单孔 27 元。

隐藏费用：

• 不含 20×洗液，自配 PBS-T 成本 160 元。
• 售后只写“质量问题可调换”，把“运输高温导致标准品失活”写进采购合同，厂商才无偿补发，否则单独购买标准品 380 元。

8. 五步速选清单（打印贴冰箱）