人基质金属蛋白酶-9 ELISA 技术参数：把 92 kDa 大分子拆成可读数字

1. 检出限 30 pg/ml：按 EP-17 还是“零孔+3SD”

真检出限需 60 次独立空白、3 批试剂、2 台仪器算 EP-17。厂家写“30 pg/ml”常按“零孔均值+3SD”充数，LOQ 实际 80 pg/ml。索要 EP-17 报告，报告里缺任何一项，审稿人都会打回重测。

2. 标曲 50–4000 pg/ml：高端为何留 25 % 富余

心梗患者血清 MMP-9 峰值 2500–3500 pg/ml。上限拉到 4000 pg/ml 并给出 1:5 稀释回收率，可避免二次稀释。验证报告里要有 3000 pg/ml 加标回收 92–108 % 区间，缺一份就换品牌。

3. 总蛋白/活性双报告：活性下降 50 % 仍报原浓度

MMP-9 酶原需活化才具胶原酶活性。ELISA 测总蛋白，活性可能只剩 50 %。说明书若写“测总 MMP-9”，科研关联病理时要同步做明胶酶谱，注明“活性与总量不成线性”，免得被质疑数据矛盾。

4. 分子量干扰：92 kDa 复合物不被抗体识别

MMP-9/NGAL 复合物 125 kDa 掩盖表位，导致 ELISA 读数偏低 20 %。参数表写“与 NGAL 交叉 < 0.1 %”代表抗体识别游离 MMP-9，复合物漏检。测脑脊液这类 NGAL 高值样本，需先 1:2 稀释再报结果。

5. 肝素血浆回收率：说明书不写等于放弃

肝素与 MMP-9 的肝素结合域结合，回收率掉到 65 %。参数表若只写“血清、EDTA 适用”却缺肝素数据，等于默认不合格。索要四种抗凝剂对比，肝素回收 < 80 % 直接淘汰。

6. 活性丢失温度：室温 6 h 掉 15 %

MMP-9 酶原室温下自动剪切，6 h 活性掉 15 %，总蛋白不变。参数表写“样本 4 °C 可存 24 h”需注明“总蛋白稳定”，做活性实验的血清必须 ?80 °C 保存，解冻一次用完。

7. 批间差 8 %：十批数据 vs 三批数据

行业默认 3 批算批间差，稳健度不足。高端厂用 10 批、3 台酶标仪，CV 仍 < 8 %。索要 10 批原始 OD 表，缺一批都可能在换批号时翻车。

8. NIBSC 溯源：代码 14/100 出现才算数

MMP-9 国际标品 NIBSC 14/100，50 000 IU/支。COA 上写 1 IU = 20 pg 且附比对图，说明浓度可追溯到 WHO。缺 14/100 对标，绝对浓度等于黑箱。

9. 板内热力图：边缘孔 OD 差一眼看穿

同一块板 A1 与 H12 因蒸发差异可达 6 %。参数写“板内差 CV < 6 %”需附 96 孔热力图，颜色梯度均匀才可信。缺图就默认 6 % 是平均值，边缘孔可能 9 % 起步。

10. 光谱干扰：溶血 5 g/L 背景 +0.09

血红蛋白 450 nm 吸光强，溶血 5 g/L 时背景 +0.09，把 200 pg/ml 报成 260 pg/ml。参数表写“双波长 450–630 nm 扣除”可把背景压到 0.02，缺此算法的高溶血样本直接判假阳性。