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永生化人胰腺成纤维细胞-SV40：选购指南
发表时间：2025-09-04背景与需求定位
原代胰腺成纤维细胞在体外只能维持 5–8 代，很快进入衰老期，无法支撑长周期实验。SV40 大 T 抗原介导的永生化技术突破了这一限制，使细胞获得持续增殖能力，同时保留胰腺微环境分泌表型。选购前，先回答三个核心问题：
- 实验周期是否超过 8 周？
- 是否需要可重复批次的同质细胞？
- 下游是否涉及基因编辑或 3D 共培养？
若答案皆为“是”，永生化人胰腺成纤维细胞-SV40 才是值得投入的资源。
关键质量指标拆解
1. SV40 整合位点与拷贝数
整合位点决定基因表达稳定性。优选单拷贝、AAVS1 安全位点敲入的株系，避免多拷贝随机整合造成的染色体不稳定。qPCR 检测报告应给出 T 抗原拷贝数 ≤2，Southern blot 条带单一。
2. 成纤维标志物表达谱
合格产品需同时满足：
- Vimentin、FSP1 阳性率 ≥ 98%
- α-SMA 阳性率 ≤ 5%，确保低活化状态
- Keratin 阴性，排除上皮污染
流式原始图谱应随货附带，不接受仅提供柱状图的形式。
3. 功能分泌验证
胰腺成纤维细胞的核心价值在于分泌因子支持类器官生长。索取以下数据：
- ELISA 检测 IL-6、HGF、FGF2 分泌量，连续 5 代变异系数 < 15%
- 与胰腺导管类器官共培养 7 d，类器官形成率 ≥ 80%，直径均一
供应商审计清单
| 审计维度 | 可接受标准 | 文件要求 |
|---|---|---|
| 细胞来源 | 原代供体单一，伦理批件齐全 | IRB 批准函、供体知情同意 |
| 质检频率 | 每批次全检，冻存前与复苏后双节点 | COA、STR 图谱 |
| 支原体 | 培养 14 d 后，qPCR Ct ≥ 38 | 第三方检测报告 |
| 运输温度 | 干冰 ≤ -60 ℃，48 h 内送达 | 实时温度记录器 |
现场审计时重点查看液氮罐批号与出库记录是否对应，避免“套牌”细胞。
包装规格与配套试剂
- 冻存管：1 × 10^6 cells / mL，每袋 1 mL，外盒铝箔真空袋
- 专属完全培养基：500 mL 基础 DMEM + 10 % FBS + 1 % ITS-X + 1 ng/mL FGF2，随细胞赠送 50 mL 试用装
- 支原体清除试剂盒：若复苏后检测阳性，供应商承诺免费补发一次细胞与清除试剂
拒绝仅提供“通用成纤维培养基”的供应商，胰腺微环境特异性因子缺失会导致细胞性状漂移。
价格区间与性价比
| 规格 | 价格区间 | 隐藏成本 |
|---|---|---|
| 1 × 10^6 cells | ￥4,800–5,500 | 不含培养基 |
| 3 × 10^6 cells | ￥9,800–11,000 | 赠送培养基 500 mL |
| 5 × 10^6 cells + 3D 培养验证报告 | ￥15,000–18,000 | 含共培养数据 |
若实验室已有稳定培养基配方，选择最小规格即可；若计划做共培养或 PDX 模型，直接购买带验证报告的套餐，节省 2–3 周验证时间。
合同陷阱与维权要点
- 细胞到达 7 d 内出现支原体阳性，供应商需全额退款或重发，写进合同而非口头承诺
- STR 图谱与说明书不符，视为批次错误，可要求双倍赔偿
- 禁止“仅接受原包装退货”条款，复苏后细胞仍享有同等质保
保留干冰运输照片、开箱视频，作为维权证据。
到货验收 SOP
- 拍摄外箱温度指示卡，确认未超温
- 37 ℃水浴 90 s 快速复苏，台盼蓝计数活率 ≥ 85%
- 复苏 24 h 后取样做支原体 qPCR，结果存档
- 第 3 代时流式复核成纤维标志物，与 COA 对照
以上步骤全部合格，才签署验收单。
长期储存建议
- 液氮气相区存储，避免液相交叉污染
- 每 6 个月抽样复苏，检测倍增时间；若 PD 时间延长 > 20%，立即启用新批次
- 建立实验室内部编号体系，记录每一次冻存与复苏日期，防止批次混淆
