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永生化人毛囊内根鞘细胞系技术参数速查表
发表时间：2025-08-26拿到细胞后 30 分钟内就能在实验记录里写下“该株系符合 ISO 20399:2022 与 ISSCR 2021 标准”，靠的就是一份可溯源、可复现、可直接引用的技术参数清单。以下 8 个维度、36 条核心数据全部来自第三方检测报告或自建实验室实测，随货文件与电子档案一一对应，扫码即可下载原始文件。
1. 来源与伦理
- 供体：24 岁男性枕部毛囊，FUE 手术残余组织
- 知情同意：医院 IRB 批件编号 2023-HF-034，可在 NIH RePORTER 核验
- 运输合规：持有《中国人类遗传资源出入境许可证》2024-HG-00125
2. 永生化元件
- 病毒载体：pLVX-EF1α-hTERT-2A-SV40T-Puro
- 整合位点：chr5:131,458,722；chr11:65,019,431（LAM-PCR + NGS）
- 拷贝数：2.1 ± 0.2 copies/diploid（数字 PCR）
3. 身份与纯度
| 标志物 | 阳性率 | 抗体克隆 | 检测方法 |
|---|---|---|---|
| KRT71 | 98 % | Abcam ab181690 | 流式 |
| CD200 | 96 % | BioLegend 329402 | 流式 |
| α-SMA | < 2 % | Sigma A2547 | IF 排除成纤维污染 |
STR 16 位点与 Genecopoeia 原始谱 100 % 匹配，报告编号 STR-HFIR-240315。
4. 生长动力学
- 倍增时间：26 ± 1 h（DMEM/F12 + 10 % FBS + 2 % HGS + 1 % ITS）
- 饱和密度：1.4 × 10? cells/cm2
- 推荐接种密度：3 × 10? cells/cm2，第 3 天 80 % 汇合
5. 功能读数
- 屏障形成：TEER 峰值 420 ± 15 Ω·cm2（Day 7，0.4 μm Transwell）
- 脂质合成：BODIPY 荧光强度 18,500 AU（对照原代 19,200 AU，差异 < 10 %）
- 炎症响应：LPS 100 ng/mL 刺激 6 h，IL-6 分泌 1,150 ± 80 pg/mL
6. 遗传稳定性
- 核型：46,XY，连续培养至 45 代未见非整倍体（G-banding，20 个中期相）
- 端粒长度：qPCR T/S 比值 1.9 ± 0.1（45 代 vs 5 代差异 < 5 %）
- 软琼脂克隆：无锚定生长阴性（14 d 观察）
7. 无菌与污染筛查
| 项目 | 方法 | 判定 | 结果 |
|---|---|---|---|
| 支原体 | qPCR | Ct ≥ 35 | 阴性 |
| 细菌 | TSB 14 d | 无浑浊 | 阴性 |
| 真菌 | SDA 14 d | 无菌丝 | 阴性 |
8. 冻存与运输
- 冻存液：90 % FBS + 10 % DMSO
- 降温程序：–1 °C / min 至 –80 °C，液氮长期
- 复苏存活率：93 ± 2 %（台盼蓝，37 °C 水浴 90 s）
- 运输条件：干冰 ≥ 5 kg，温度记录仪 CSV 文件随货
附录：可直接引用的方法描述
“永生化人毛囊内根鞘细胞系（HFIR-SV40T-hTERT）源自 24 岁男性枕部毛囊，经 EF1α 驱动 hTERT 与 SV40T 慢病毒整合，STR 16 位点 100 % 匹配，支原体、细菌、真菌三重阴性，第 30 代倍增时间 26 ± 1 h，TEER 峰值 420 Ω·cm2。”
