永生化小鼠颈动脉内皮细胞-SV40T 技术参数全景档案

基因组修饰坐标

SV40T 片段整合于小鼠 11 号染色体 71.3 Mb 位点，单拷贝 PiggyBac 插入，两侧为 TTAA 靶点序列。全基因组测序显示插入后 SNV 负荷 1.8/Mb，Indel 负荷 0.3/Mb，均低于行业警示阈值 5/Mb。

倍增动力学

完全培养基（DMEM-low glucose + 20 % FBS + ECGS）中，P5–P35 线性倍增时间 21 ± 1.3 h，CPD 斜率 0.97。进入 P40 后斜率降至 0.55，提示衰老启动，官方建议终止实验并启用新 Master Bank。

表型保留硬指标

核型稳定性

G-banding 检测 40,XY 模式保持率 99 %，结构异常仅见于 11 号染色体插入位点附近 2 Mb 倒位，对血管功能基因无影响。每 10 代复核一次，数据公开。

质粒转染与编辑效率

• Lipofectamine 3000：85 % ± 4 %
• PEI 25 kDa：78 % ± 6 %
• Neon 电穿孔：91 % ± 3 %

CRISPR-Cas9 RNP 靶向 AAVS1 位点，HDR 插入效率 34 %，NHEJ 比例 12 %。

冻存与复苏

冻存液：90 % FBS + 10 % DMSO + 5 % 海藻糖，密度 3.5 × 10? cells/mL。程序降温 -1 °C/min 至 -80 °C，24 h 后入液氮。复苏存活率 94 %，贴壁率 96 %，4 h 内换液即可继续实验。

支原体与病毒检测

• qPCR 支原体 Ct ≥ 36
• 小鼠病原体 Panel（11 项）全部阴性
• 内毒素 < 0.1 EU/mL

批次报告与冻存管二维码绑定，扫码实时查看原始数据。

剪切应力平台推荐参数

使用 Ibidi® 载玻片通道，高度 0.4 mm，剪切范围 5–30 dyn/cm2，细胞加载密度 2 × 10? cells/cm2。预铺胶原Ⅰ 50 μg/mL，4 °C 过夜，确保无剥离。

配套试剂与耗材锁号

• FBS：Gibco A5256701，经 NO 释放验证
• 胶原Ⅰ：Corning 354236，LDEV-free
• 电转缓冲液：Thermo MPK100

批次号锁定在出厂报告中，避免自行更换导致漂移。