永生化小鼠雪旺细胞（IMS32）的操作使用指南

一、细胞特性与功能概述

• 永生化小鼠雪旺细胞（IMS32）是一种源自成年 ICR 小鼠背根神经节和周围神经组织的细胞系，具有贴壁、纺锤形生长特性。
• 这些细胞表达胶质细胞标记物（如 S100、GFAP、p75NTR）、参与施万细胞发育和周围髓鞘形成过程中的转录因子（如 Krox20、Oct6、PAX3 和 SOX10），以及神经营养因子（如 NGF、BDNF、GDNF 和 CNTF），在周围神经的轴突髓鞘形成和维持、神经损伤后的轴突再生过程中发挥关键作用，也参与运动和感觉神经元的维持，可用于研究神经再生、脱髓鞘疾病等神经学领域。

二、培养基的配制与选择

• 培养基：推荐使用 PriCoat? T25 烧瓶或应用细胞外基质以促进细胞粘附，培养基为 PriGrow III + 10% FBS + 1% 青霉素 / 链霉素溶液，培养条件为 37℃、5% CO?。

三、细胞的复苏与冻存

• 冻存：将细胞收集并制成单细胞悬液，加入含 5% DMSO 的冻存液中，轻轻混匀后分装于冻存管，放入 - 80℃冰箱中预冻，24 小时后转入液氮罐中长期保存。
• 复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃水浴中快速解冻，待细胞悬液完全解冻后，立即转移到含有适量预热培养基的离心管中，低速离心后去除上清，用新鲜培养基重悬细胞并接种到培养瓶中进行培养。

四、细胞的传代

• 当细胞密度达到 70%-90% 汇合时，即可进行传代。
• 传代步骤：
  1. 吸去上清液，加入 100mm 培养皿 10 至 12mL 培养基。
  2. 通过反复吸打使细胞从培养皿表面脱落。
  3. 在显微镜下检查细胞是否完全脱落。
  4. 将细胞悬浮液收集到 50mL 离心管中。
  5. 将细胞悬浮液与培养基按 1:3 至 1:4 的比例混合，并将其接种到新的培养容器中。
  6. 在 37℃、5% CO? 的条件下培养。

五、细胞培养的观察与记录

• 肉眼观察：主要观察培养基的颜色变化及细胞生长情况。若培养基颜色变黄、变浑浊等，可能提示细胞状态不佳或受到污染。
• 显微镜观察：定期在倒置显微镜下观察细胞的形态、生长状态等。正常的 IMS32 细胞呈纺锤形，立体感强。

六、细胞培养的污染与防治

• 污染种类：常见的有细菌、酵母菌、霉菌和病毒等污染。
• 预防方法：严格无菌操作技术，如在超净工作台内进行操作、使用无菌器械和试剂等；保持操作环境清洁；使用良好的细胞来源和培养基配制。
• 检测与处理：可通过肉眼直接观察法、培养检查法、显微镜观察法、PCR 检测等方法检测污染。一旦发现污染，应及时采取相应的处理措施，如丢弃培养物、使用抗生素等。