Annexin V-AbFluor™ 647 细胞凋亡/周期检测试剂盒工作原理详解

一、试剂盒概述

Annexin V-AbFluor? 647 细胞凋亡/周期检测试剂盒是一种用于高灵敏度检测细胞凋亡和细胞周期的试剂盒。它通过 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸（PS）的特异性结合，结合碘化丙啶（PI）双染技术，实现凋亡早晚期细胞及死细胞的精准区分，适用于流式细胞术与荧光显微镜检测。

二、工作原理

• 细胞凋亡过程中的 PS 外翻：在正常细胞中，PS 位于细胞膜内侧，细胞凋亡时，PS 会从细胞膜内侧翻转到外侧，暴露于细胞外环境。
• Annexin V 与 PS 结合：Annexin V 是一种依赖 Ca2?的磷脂结合蛋白，对 PS 具有高亲和力。当细胞发生凋亡，PS 外翻至细胞膜外侧时，Annexin V 可与其结合，从而识别凋亡细胞。
• PI 的染色作用：PI 是一种荧光核染料，不能穿透活细胞和早期凋亡细胞的完整细胞膜，但能透过晚期凋亡和坏死细胞的细胞膜，使细胞核染色。通过 Annexin V 和 PI 的联合染色，可以区分活细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。

三、试剂盒组分及作用

• Annexin V 结合缓冲液（5×）：用于稀释和重悬细胞，为 Annexin V 与 PS 的结合提供适宜的环境，包括适当的离子强度和 pH 值等，其成分和配比能稳定细胞状态，减少非特异性结合。
• Annexin V-AbFluor? 647：是 Annexin V 与 AbFluor? 647 荧光染料的标记物。AbFluor? 647 染料具有优异的荧光性能，其激发波长为 650nm，发射波长为 665nm，相比其他类似染料，如 Alexa Fluor 647、Cy5、DyLight? 649 等，具有更高的荧光强度和光稳定性，能更清晰地标记凋亡细胞。
• 碘化丙啶（PI）：PI 的激发波长为 535nm，发射波长为 617nm。活细胞和早期凋亡细胞由于细胞膜完整，PI 无法进入细胞内，因此细胞核不被染色；而晚期凋亡和坏死细胞的细胞膜失去完整性，PI 可进入细胞与 DNA 结合，使细胞核发出红色荧光。

四、检测方法及优势

• 流式细胞术：可快速定量分析大量细胞的凋亡情况。通过设置不同对照样品，如阴性对照细胞（不加染料）、单染 Annexin V-AbFluor? 647 细胞、单染 PI 细胞，调整电压和光补偿后，能准确区分四类细胞：活细胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡细胞（Annexin V+/PI+）和坏死细胞（Annexin V-/PI+）。
• 荧光显微镜检测：适用于观察细胞的形态学变化和单个细胞的凋亡情况。对于悬浮细胞，可按照流式细胞术步骤操作后，将细胞悬液置于玻片上进行观察；对于贴壁细胞，可在盖玻片或培养室中培养和诱导凋亡后，加入工作液孵育，再进行观察。

Annexin V-AbFluor? 647 细胞凋亡/周期检测试剂盒具有以下优势：

• 高灵敏度和特异性：能精确区分不同阶段的凋亡细胞和死细胞，对早期凋亡细胞的检测具有很高的灵敏度。
• 双通道检测：Annexin V-AbFluor? 647 和 PI 的荧光发射波长不同，可实现双通道检测，提供更全面的细胞凋亡信息。
• 良好的兼容性：适配主流流式细胞仪及荧光显微镜平台，方便不同实验室根据现有设备选择使用。