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葡萄糖含量检测试剂盒实验解决方案

发表时间：2025-01-20

原理

葡萄糖（C6H12O6, FW:180.16）是一种主要的生物燃料源，用于产生通用的能量分子ATP。由于葡萄糖在代谢中的重要性，葡萄糖水平是许多代谢紊乱的关键诊断参数。葡萄糖水平异常与几种代谢功能异常有关，如低血糖、高血糖和糖尿病。组织和体液（如血液和尿液）中葡萄糖水平的测量通常用于诊断葡萄糖相关疾病。还监测血糖水平，以检查胰岛素和磺酰脲类药物在2型糖尿病中的疗效。CheKine?葡萄糖检测试剂盒（微量法）可检测血清、血浆、尿液、其他体液、食物、生长培养基等，其原理是改进的邻甲苯胺法，利用与葡萄糖的特定颜色反应，630 nm处的吸光度与样品中的葡萄糖浓度成正比。

自备耗材

·酶标仪或可见光分光光度计（能测630 nm处的吸光度）及水浴锅

·96孔板或微量玻璃比色皿

·低温离心机、水浴锅

·可调节式移液枪及枪头

·去离子水、PBS

·匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

o-Toluidine Reagent: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

注意：o-Toluidine Reagent有毒性，实验时请佩戴口罩手套等防护措施。

Glucose Standard (300 mg/dL): 即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。

Standard设置：按下表所示，用去离子水将Glucose Standard 300 mg/dL稀释为300、200、100、50、20、10、4 mg/dL的标准溶液。

序号	300 mg/dL标准品体积（μL）	去离子水体积（μL）	标准品浓度（mg/dL）
Std.1	150	0	300
Std.2	100	50	200
Std.3	50	100	100
Std.4	25	125	50
Std.5	10	140	20
Std.6	5	145	10
Std.7	2	148	4

注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4 h之内使用。

样本制备

注意：建议使用新鲜样本。如果不能马上进行该项实验，样本可在储存-80℃一个月。

1.动物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL PBS，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。

2.植物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL PBS捣碎，冰浴超声波破碎5 min（功率20％或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。

3.细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL PBS，冰浴超声波破碎细胞或细菌5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。

4.血浆，血清和尿液（和其他生物液体）：直接检测。

实验步骤

1.酶标仪或可见光分光光度计预热30 min以上，调节波长到630 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2.操作表（下述操作在EP管中操作）：

试剂	空白管（μL）	标准管（μL）	测定管（μL）
上清液	0	0	25
Standard	0	25	0
去离子水	25	0	0
o-Toluidine Reagent	500	500	500

3.混匀，在沸水浴中加热8 min，冷水浴（4℃）中冷却4 min。取200 μL到96孔板或微量玻璃玻璃比色皿，检测630 nm处吸光值。空白孔记为A空，标准孔记为A标、测定孔记为A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。

注意：空白孔只需测定1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本的ΔA测高于300 mg/dL标准品值，将样本用去离子水进行稀释后，再进行实验。结果需乘以稀释系数(n)。如果样本的ΔA测低于4 mg/dL标准品值，可提高样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为y轴，ΔA_标为x轴，绘制标准曲线。

2. Glucose浓度的计算

将样本的ΔA_测代入方程得到y值（mg/dL）。

(1) 按样本鲜重计算

Glucose含量(mg/g 鲜重)=y÷100×V_样÷(W×V_样÷V_样总) ×n=y÷100÷W×n

(2) 按样本体积计算

Glucose含量(mg/dL)=y×V_样÷V_样×n=y×n

(3) 按细胞或细菌数量计算

Glucose含量(mg/10⁴)=y÷100×V_样÷(500×V_样÷V_样总)×n=y÷50,000×n

V_样：加入样本体积，0.025 mL；100：1 dL=100 mL；W：样本质量，g；V_样总：加入PBS体积，1 mL；n：样本稀释倍数；500：细胞或细菌总数，500万。

换算：1 mg/dL葡萄糖等于55.5 μM，0.001%或10 ppm。

典型的血清/血浆葡萄糖值：70-110 mg/dL。

结果展示

典型标准曲线

ΔA630

Figure 1. 葡萄糖检测的标准曲线，以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

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Catalog No.	Product Name
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