核心技术：荧光素酶-荧光素反应体系

萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）在ATP、Mg2?和氧气存在下，催化荧光素（D-Luciferin）发生氧化反应，产生生物发光信号。信号强度与酶活性呈线性关系，灵敏度可达10?2? mol/L。反应体系需严格控温在22-25℃，pH维持在7.8±0.2，避免二价阳离子沉淀干扰。

检测灵敏度与线性范围

典型试剂盒的检测灵敏度为0.1 fg/mL重组荧光素酶，线性范围跨越6-8个数量级。Promega GloMax® 系列可检测低至0.01 pg的靶蛋白，线性相关系数R2＞0.99。需注意高浓度样本可能引发信号淬灭，建议进行1:10-1:100梯度稀释验证。

动力学特性参数

反应速率在注入底物后2秒达到峰值，半衰期依据配方不同存在差异。耐热型荧光素酶（Ultra-Glo?）半衰期延长至5小时，适合高通量筛选。快速衰减型试剂（Steady-Glo®）半衰期仅30分钟，适用于即时检测。

基质兼容性数据

试剂盒需兼容细胞裂解液、血清血浆等复杂基质。标准配方可耐受≤5%血清浓度，≥90%细胞存活率条件下无显著细胞毒性。对于组织匀浆样本，建议离心去除不溶物，避免光散射干扰。

稳定性指标

未开封试剂在-20℃下保存24个月活性损失＜5%，反复冻融超过3次会导致信号衰减15%-30%。工作液在室温条件下需在8小时内使用，预混ATP的试剂体系需在冰上避光保存。

仪器适配参数

发光信号检测依赖光度计的光电倍增管（PMT）性能，建议选择动态范围＞10?的仪器。96孔板检测时，读值时间需优化为0.5-1秒/孔，延迟时间设置100ms可有效排除背景噪声。