PDGF-BB 技术参数全析：从蛋白骨架到质控阈值

分子骨架：109 个氨基酸的同源二聚体

• 单体 109 aa，理论分子量 12.3 kDa，二硫键连接后表观 24 kDa，非还原 SDS-PAGE 呈单带
• 链间二硫 Cys43-Cys43 键长 2.05 ?，还原剂 DTT 10 mM 即可断开，单体条带 12 kDa 重现
• 晶体结构显示二聚体呈“长椭球”轴比 3:1，流体动力学半径 2.4 nm，SEC 出峰体积对应 28 kDa

糖型占位：CHO 表达 vs 大肠杆菌

• CHO 表达在 Ser52 位带核心岩藻糖，糖链占比 8 %，表观分子量 30 kDa
• 无糖基化大肠杆菌版本活性相同，体内半衰期缩短 30 %，价格降低 25 %
• 做动物实验优先选 CHO 型，糖链延长血清 t1/2 至 5.2 h，减少注射频次

活性单位：EC50 绝对值与相对比

• Balb/c 3T3 细胞增殖 EC50 1.5 ng/mL，批间差 CV ≤ 5 % 视为合格
• 人源间充质干细胞迁移 ED50 0.8 ng/mL，与 3T3 差异 1.9 倍，写方案时注明细胞类型
• 1 mg 干粉理论活性 6.7 × 10^5 IU，用前以 EC50 校准，避免单位换算误差

纯度阈值：SEC-HPLC 单体 ≥ 98 %

• 聚集体 ≥ 1 % 时，3T3 增殖曲线平台下降 10 %，EC50 右移 0.3 log
• 还原 CE-SDS 重链 ≤ 1 %，轻链杂带 ≤ 0.5 %，确保无非特异刺激
• 内毒素 ≤ 0.1 EU/mg，原代平滑肌细胞培养 48 h 无形态改变

亲和力常数：与 PDGFRβ 结合动力学

• SPR 测定 PDGF-BB 与 PDGFRβ 胞外区 KD 0.12 nM，kon 1.8 × 10^6 M^-1s^-1，koff 2.2 × 10^-4 s^-1
• 与肝素共孵育后，表观 KD 降至 40 pM，肝素浓度 10 μg/mL 为最佳
• 做芯片固定时，氨基偶联密度 3000 RU 给出最大响应，继续升高出现质量转移假象

热稳定性：Tm 值与保存期限换算

• 差示扫描量热法给出 Tm 72 °C，10 mM 柠檬酸 pH 4.0 下降 8 °C
• 40 °C 加速 4 周，活性保留 95 %，反推 4 °C 真实有效期 36 个月
• 冻融 3 次 Tm 下降 1 °C，单体损失 ≤ 0.5 %，设定 5 次为红线

标签取舍：His vs 无标签

• C 端 6×His 便于 IMAC 一步纯化，SPR 固定使用 NTA 芯片，节省生物素化步骤
• 无标签版本分子量准确，适合晶体学，避免金属离子干扰结晶条件
• 做动物实验选无标签，降低免疫原性，小鼠重复注射 7 天未检出抗 His 抗体

质控参比：实验室“金批”建立

• 选三批 GMP 级 PDGF-BB，混池后分装 50 μg/管，-80 °C 保存
• 每季度与金批做平行增殖实验，EC50 差异 ≤ 5 % 视为系统稳定
• 金批用完前 6 个月启动新一轮混池，保持量值溯源链不断

单位换算：mg、IU、OD280 速查

• A280 0.55 对应 1 mg/mL，光程 1 cm
• 1 mg 理论活性 6.7 × 10^5 IU，用前以 3T3 EC50 校准
• 摩尔消光系数 11 500 M^-1cm^-1 每单体，二聚体换算乘 2