CNTFR 技术参数全景：从蛋白尺寸到信号读取的硬指标

分子尺寸：373 aa 带来的空间占位

• 成熟 CNTFR 胞外区 346 aa，理论分子量 40.2 kDa，SDS-PAGE 显示 45 kDa 由糖基化贡献
• 糖链以复杂型 N-糖为主，G2F 占比 55 %，电镜下呈直径 12 nm 蘑菇状突起
• 跨膜段 23 aa 富含 Leu，α-螺旋指数 1.18，决定膜上刚性定位

糖型占比：G0F/G2F 比例影响配体结合

• CHO 表达 G0F 60 % 批次，与 CNTF 结合 KD 0.9 nM
• 同一载体 G2F 提升到 70 %，KD 收紧到 0.4 nM，信号放大 2 倍
• 做 SPR 定量时，要求 COA 给出糖型百分比，误差 > 3 % 直接换批

亲和力常数：三聚体组装的核心参数

• CNTF 与 CNTFR 单独结合 KD 1.1 nM
• 加入 gp130 与 LIFR 形成三元复合物后，表观 KD 降至 45 pM，滞留时间延长 10 倍
• 突变 W272A 使结合力下降 20 倍，用于阴性对照实验

热稳定性：Tm 值与保存期限换算

• 胞外区 Tm 65 °C，跨膜区 52 °C，差值 13 °C 提示去垢剂提取时温度 ≤ 30 °C
• 40 °C 加速 4 周，SPR 信号下降 5 %，反推 4 °C 可保存 30 个月
• 冻融 3 次 Tm 下降 1.2 °C，聚集体 ≤ 1 %，设定 3 次为红线

活性单位：EC50 与 ED50 双标

• TF-1 细胞增殖 EC50 0.8 ng/mL，每批误差 ≤ 10 %
• 小鼠体内 ED50 0.15 mg/kg，腹腔注射 6 h 后 STAT3 磷酸化峰值
• 活性单位用 "CNTF 等效 ng" 表示，避免跨平台换算出现 20 % 偏差

纯度阈值：SEC-HPLC 单体 ≥ 98 %

• 聚集体 ≥ 2 % 时，TF-1 增殖曲线出现平台下降，EC50 右移 15 %
• 还原 CE-SDS 重链 ≥ 98 %，轻链 ≤ 0.5 %，确保无游离标签
• 内毒素 ≤ 0.1 EU/mg，否则原代神经元出现 5 % 凋亡背景

标签选择：His vs Fc 的传感差异

• C 端 6×His 便于 SPR 固定，NTA 芯片表面密度 2500 RU，信号线性
• Fc 融合二聚体增加分子量，SPR 动力学拟合需改 1:2 模型
• 做晶体学优先选无标签，避免金属离子干扰结晶条件

质控参比：实验室金批建立

• 选三批 GMP 级 CNTFR，混池后分装 50 μg/管，-80 °C 保存
• 每季度跑一次 TF-1 增殖，EC50 RSD ≤ 5 % 视为系统稳定
• 新批先与金批做平行 SPR，结合速率差异 ≤ 5 % 方可入库

单位换算：mg、IU、OD280 速查

• 1 mg CNTFR = 1.2 × 10^4 IU WHO 国际标准 19/180
• A280 1.55 对应 1 mg/mL，光程 1 cm
• 摩尔消光系数 48 000 M^-1cm^-1，做 FortéBio 定量直接代入 1:1 模型