IL-17E/IL-25 定量检测技术参数拆解：从灵敏度到交叉反应

1. 分子身份：IL-17E 为何又叫 IL-25

• 染色体定位：14q11.2，与 IL-17A/B 相距 >50 cM，独立调控
• 蛋白架构：161 aa 分泌型，5 个半胱氨酸形成 2 对二硫键，缺失还原即失活
• 血清形式：单体 17 kDa + 糖基化 3 kDa，ELISA 实测 20 kDa，糖链缺失不影响抗体识别

2. 校准曲线与灵敏度

• 7 点定标：0-2000 pg/mL，4-PL 拟合 r ≥0.995，零孔 CV<5 %
• LOD 计算：空白均值 + 3×SD，实测 1.8 pg/mL，可检出哮喘患者鼻腔灌洗液基础值
• 功能灵敏度：CV≤10 % 下限 4 pg/mL，用于纵向跟踪过敏原刺激后早期上升

3. 抗体对与表位

• 捕获克隆：127925，鼠 IgG2a，识别 34-52 aa 环，耐受糖基化变异
• 检测抗体：BAF1397，山羊多抗，生物素标记，识别 80-100 aa，形成 25 nm 臂距，减少空间位阻
• 验证数据：加入 200 ng/mL IL-17A/F，交叉信号 <0.1 %，确保 Th17 共存样本不误读

4. 精密度与回收率

通过 NCCLS EP15-A3 方案验证，可直接写进注册资料

5. 样本体积与处理

• 血清用量：50 μL，1:2 预稀释，稀释液含 10 % 动物血清封闭异嗜抗体
• EDTA 血浆：与血清斜率差 2 %，可共用标准曲线，溶血指数 <500 mg/dL 无干扰
• 鼻腔灌洗液：离心 12000 g 10 min 去细胞，上清直接上机，检测范围 5-400 pg/mL

6. 稳定性与加速老化

• 冻干标准：37 °C 7 天，回收率 93 %，水分 ≤3 %，二聚体 <2 %
• 开封后效期：2-8 °C 4 周，信号日衰减 0.2 %，第 30 天仍在线性偏差带
• 冻融耐受：?80 ? 室温 3 次，CV<8 %，建议到货即分装 50 μL/管，避免反复

7. 仪器兼容性

• 酶标仪波长：450 nm 主读，630 nm 参比，带宽 10 nm，OD 线性 0-3.0
• 化学发光升级：SuperSignal Femto，发光信号提升 6 倍，LOD 降至 1.2 pg/mL
• 全自动平台：Tecan Fluent 脚本内置，100 μL 反应体系，CV≤3 %，适合 384 孔高通量

8. 常见问题速查