Thrombopoietin/TPO 技术参数：把“看不见”的活性量化成可对比的数字

活性单位：IU 与 pg 的换算关系不是固定 1:10

WHO 标准品 96/602 每支 5000 IU，质量标称 50 ng，理论 1 IU = 10 pg。不同表达体系糖型占比不同，CHO 源 TPO 比活 9.8 IU ng?1，E.coli 源仅 6.2 IU ng?1。写实验方案时，先问厂家要“IU 实测报告”，把浓度换算成 IU mL?1，跨品牌比较才不会差出 30 %。

比活性：≥ 1 × 10? IU mg?1 是临床前底线

体外 Meg-01 细胞增殖 ED?? 0.8–1.2 ng mL?1，对应比活 1 × 10? IU mg?1。低于这个值，小鼠体内 50 μg kg?1 剂量血小板提升仅 30 %，达不到药效窗口。采购重组蛋白时，把 ED??写在合同附件，到货复测偏差＞20 % 直接退货。

糖基化位点：CHO 源 6 个，HEK293 源 7 个

TPO 序列 332 aa，N-糖位点 Asn 45、78、100、151、309，CHO 细胞只做前 5 个；HEK293 把 Asn 226 也做上，分子量从 60 kDa 涨到 65 kDa。糖多一圈，体内半衰期从 6 h 延长到 10 h，动物实验剂量可降 40 %。做长效制剂优先选 HEK293 源，体外酶活实验两种糖型 ED?? 无差异。

内毒素：0.1 EU mg?1 是细胞实验红线

TPO 本身激活 TLR4，内毒素 1 EU mg?1 会让巨噬细胞分泌 TNF-α 的 EC?? 左移 3 倍。厂家 COA 写 ＜0.5 EU mg?1，实际 0.3 EU 就能干扰。要求到货批批做 LAL，上限 0.1 EU mg?1，多付 8 % 费用，能省掉后续“背景过高”的重复实验。

纯度：SDS-PAGE 一条带不够，SEC-HPLC 聚体＜2 %

还原 SDS-PAGE 看到 35 kDa 单条带，看似 98 % 纯度，SEC-HPLC 可能藏 5 % 聚体。聚体在体内被巨噬细胞快速清除，半衰期腰斩。合同里加一条“SEC-HPLC 聚体＜2 %”，到货复测 280 nm 面积归一化，超标就触发索赔，批次稳定性直接拉满。

冻干保护：海藻糖 5 % + 0.005 % Tween-20，25 °C 加速 4 周活性掉＜5 %

冻干前加 5 % 海藻糖，形成玻璃态，阻断蛋白聚集；0.005 % Tween-20 抑制界面变性。25 °C 加速 4 周，ED?? 偏移 4 %，不加保护剂偏移 18 %。发文章做长期稳定性，直接引用 ICH Q1A 标准，审稿人不会再要求补实验。

摩尔消光系数：ε?.?% = 0.83，算浓度不再靠 Bradford

TPO 含 6 个 Trp、11 个 Tyr，理论 ε?.?% 280 nm = 0.83。用 A??? 直接定量，比 Bradford 法省 10 min，误差＜3 %。实验室没紫外分光光度计，可用 NanoDrop 2 μL 快速测，浓度换算公式：

mg mL?1 = A??? / 0.83 × 稀释倍数

写在 SOP 里，新人也能一次做对。

质谱分子量：+183 Da 是 Met 氧化，-18 Da 是信号肽残留

LC-MS 实测 60038 Da，比理论值 60020 Da 多 18 Da，说明信号肽末端多一个 Gly，未完全切除。+183 Da 峰是 Met 106 氧化，活性下降 12 %。把这两个质量差写进质检标准，到货 MS 报告必须“无 +183 Da 峰，-18 Da 峰＜5 %”，批次质量直接锁死。

储存浓度：0.5 mg mL?1 是分界线

低于 0.5 mg mL?1，TPO 容易吸附管壁，24 h 损失 10 %。工作液先配到 1 mg mL?1，再分装 50 μL，–80 °C 一次用完。稀释到 10 μg mL?1 时加 0.1 % HSA 做载体，回收率拉回 95 %。