IL-17A 技术参数：把 50 μL 上样量拆成 pg 级线性窗口

1. 标准曲线锚点：7 点覆盖 0.5–500 pg/mL

ELISA 试剂盒默认 6 点常出现高平台“压顶”，把最高标品拉到 500 pg/mL 再加 1 个 0.5 pg/mL 低锚点，四参数拟合 R2 能稳在 0.998。低区信号 <0.1 OD 时，把 TMB 底物延长显色 15 min，背景不会飘，0.5 pg/mL 检出率从 60% 提到 95%。

2. 灵敏度门槛：LoB 0.2 pg/mL、LoD 0.4 pg/mL

CLSI EP17-A2 方案跑 60 次零孔，平均 +3SD 得到 LoB 0.18 pg/mL；再用 3 个低浓度（0.2、0.4、0.8 pg/mL）各 20 复孔，实测 0.4 pg/mL 回收 CV 18%，符合 <20% 要求，直接定为 LoD。低于 0.4 pg/mL 的样本报“<LoD”，避免临床误判。

3. 血清稀释线性：1∶4 开始，梯度回收 95–105%

IL-17A 与补体 C3 互作导致高剂量钩状效应。原液血清 1∶4 稀释后基质干扰最低，再做 2 倍系列稀释到 1∶64，实测回收区间 96–103%。稀释液用 1% BSA-PBS，不含 Tween-20，可把胶体干扰降到 0.05 OD 以下。

4. 板间差控制：酶标仪增益 80，震动 5 s，静置 30 s

同一块 96 孔板读数 CV <5% 不算本事，板间差才是质控核心。把增益固定在 80，减少光电倍增管漂移；读前中速震荡 5 s 打破弯月面，静置 30 s 让气泡破裂，连续 10 块板测 50 pg/mL 质控品，CV 稳在 6.2%，符合内部 SOP <8% 红线。

5. 冻融上限：3 次为界，活性损失 12%

重组 IL-17A 100 ng/mL 分装后 ?80 °C 保存，经历 1、2、3、5 次冻融，活性依次为 100%、96%、88%、71%。把警戒线设在 3 次，任何样本再融一次直接报废，避免临床复查出现“假低值”。

6. 回收加标：80、160 pg/mL 双水平覆盖灰区

选取 30 例健康混合血清，基础值 <2 pg/mL，加标 80 pg/mL 与 160 pg/mL，回收率 92–107%，总 CV 5.8%。灰区样本（15–40 pg/mL）用 80 pg/mL 加标即可判断是否存在基质抑制，无需再做倍比稀释。

7. 仪器交叉校准：FLIS 对标 MSD，斜率 1.05

实验室内部同时跑 ELISA（FLIS）与电化学发光（MSD），40 例风湿样本分布于 2–400 pg/mL，Passing-Bablok 回归斜率 1.05，R=0.98。把转换系数写进 LIMS，结果互认，避免临床科室因数值差异反复送检。