乳酸脱氢酶检测操作使用全流程解析

在临床诊断与生命科学研究领域，乳酸脱氢酶（LDH）检测是一项极具价值的指标。精准规范的检测操作流程，是获取可靠检测数据的关键前提。

样本采集与前处理规范

血液是 LDH 检测常见样本类型。采集时，需采用干燥、无添加剂的专用采血管，采血量一般控制在 3 - 5ml。采血后，应轻轻颠倒采血管 8 - 10 次，确保血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。对于血清样本，需在室温下静置 30 分钟，待血液完全凝固后再进行离心。离心转速设置为 3000rpm，持续离心 10 分钟，此参数是经过大量实验验证得出的最优条件，既能有效分离出血清，又可避免细胞破损释放过多 LDH 造成检测结果偏高。离心后的血清应尽快进行检测，若不能及时检测，需放置于 2 - 8℃冰箱中保存，但保存时间不宜超过 24 小时。

试剂准备与加样要点

LDH 检测试剂盒在使用前需提前 30 分钟从冰箱取出，放置至室温平衡。试剂平衡至室温的过程，犹如唤醒沉睡的检测系统，各组分活性逐渐恢复至最佳状态。加样时，移液器需精准校准，误差控制在 ±2% 以内。吸取样本时，移液器枪头应垂直插入样本液面下 2 - 3mm 处，避免产生气泡。加样量根据试剂盒说明书要求，一般在 20 - 50μl 之间。加样动作需轻柔而准确，加样后轻轻晃动反应板，使样本与试剂充分混合，但晃动幅度不宜过大，以防液体溅出。

酶反应启动与孵育条件控制

当样本与试剂混合均匀后，酶反应即刻启动。LDH 在催化反应中发挥关键作用，将乳酸转化为丙酮酸，同时伴随着 NAD+ 还原为 NADH。这个过程对温度极为敏感，37℃是公认的最适反应温度。实验室常用水浴孵箱或酶标仪自带孵育功能进行温控。孵育时间一般设定为 15 - 30 分钟，时间过短，反应不充分，吸光度值偏低；时间过长，可能导致反应体系中底物耗尽，酶活性下降，同样影响检测结果准确性。

信号读取与结果分析要点

孵育完成后，使用酶标仪在 340nm 波长下读取吸光度值。340nm 是 NADH 特征吸收峰，吸光度值与样本中 LDH 活性呈正相关。读取时，酶标仪需预热 30 分钟，光路系统需保持清洁，避免灰尘或液体残留干扰光信号传输。结果分析时，依据试剂盒提供的标准曲线方程进行计算。标准曲线需定期重新绘制，以验证试剂盒性能稳定性。若检测结果超出标准曲线线性范围，需对样本进行适当稀释后重新检测。

质控品同步检测与结果评估

每次检测都应同步检测低、中、高三个浓度的质控品。质控品犹如检测系统的 “标尺”，其结果可反映整个检测流程的准确性与精密度。低浓度质控品结果波动范围应控制在 ±10% 以内，中、高浓度控制在 ±8% 以内。若质控结果偏离此范围，需立即排查问题，可能是试剂配制错误、仪器校准偏差或操作步骤失误等。只有质控合格的检测结果，才具有临床参考价值。