CheKine™ 3 - 磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒（微量法）

一、试剂盒概述

CheKine? 3 - 磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒（微量法）是一种用于检测样本中 3 - 磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性的工具。GAPDH 是糖酵解途径中的关键酶，在细胞能量代谢中具有重要作用。该试剂盒采用微量法，具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点，适用于多种生物样本的检测。

二、检测原理

GAPDH 催化 3 - 磷酸甘油醛氧化为 1,3 - 二磷酸甘油酸，在此过程中，NAD?被还原为 NADH。试剂盒中的底物和辅助因子能够与 GAPDH 反应，生成可在特定波长下检测的产物。通过测定该产物的吸光度或荧光强度，即可计算出 GAPDH 的活性。

三、实验步骤

（一）样本准备

1. 组织样本：准确称取适量组织，用预冷的生理盐水洗涤，去除血液和杂质，按质量体积比加入组织裂解液，冰上充分匀浆，离心取上清液备用。
2. 细胞样本：收集细胞，用生理盐水洗涤，加入细胞裂解液，吹打混匀，冰上裂解，离心取上清液。
3. 蛋白提取物样本：根据试剂盒说明书，对蛋白提取物进行适当处理，确保 GAPDH 酶活性不受影响。

（二）试剂准备

1. 试剂配制 ：按照试剂盒说明书的要求，配制相应的试剂，如反应缓冲液、底物溶液、NAD?溶液等。
2. 试剂预冷 ：将配制好的试剂置于冰上预冷，以减少反应过程中的非特异性误差。

（三）反应体系设置

1. 反应体系组成 ：在微量反应板或适当容器中，依次加入样本、反应缓冲液、底物溶液和 NAD?溶液等试剂，轻轻混匀。
2. 反应条件 ：将反应体系置于合适温度（一般为 37℃）下孵育一定时间，使反应充分进行。

（四）检测

1. 吸光度检测 ：使用酶标仪或分光光度计，在特定波长下测定反应体系的吸光度值。
2. 荧光强度检测 ：若试剂盒采用荧光检测方法，可使用荧光光度计检测反应体系的荧光强度。

四、实验结果解读

1. 酶活性计算 ：根据测得的吸光度或荧光强度值，结合标准曲线或公式，计算样本中 GAPDH 的活性。
2. 结果分析 ：比较不同样本之间的 GAPDH 活性差异，分析其在细胞代谢、疾病研究或药物筛选等方面的意义。
3. 注意事项 ：实验过程中需严格控制反应条件，避免样本之间的交叉污染。同时，应设置适当的对照组，以确保实验结果的准确性和可靠性。