# Annexin V-AbFluor™ 647 细胞凋亡检测试剂盒：精准检测细胞凋亡的红色荧光利器

在细胞生物学研究中，细胞凋亡的检测对于揭示细胞生理和病理机制至关重要。Annexin V-AbFluor? 647 细胞凋亡检测试剂盒以其高灵敏度和特异性，成为科研人员研究细胞凋亡的得力工具。

一、试剂盒的组成与工作原理

Annexin V-AbFluor? 647 细胞凋亡检测试剂盒主要包含 Annexin V-AbFluor? 647 和碘化丙啶（PI）。Annexin V 是一种能特异性结合磷脂酰丝氨酸（PS）的蛋白，在细胞凋亡早期，PS 会从细胞膜内侧翻转至外侧，Annexin V-AbFluor? 647 可标记早期凋亡细胞，发出红色荧光。PI 则用于标记晚期凋亡或坏死细胞，其可与细胞内的 DNA 结合并发出红色荧光。

二、操作使用方法

染色前准备

1. 细胞培养与收集：根据实验需求培养细胞至合适密度，贴壁细胞用胰蛋白酶消化，悬浮细胞直接收集。用 PBS 洗涤细胞，去除培养基成分。
2. 细胞悬浮：用 Binding Buffer 悬浮收集的细胞，调整浓度至1×105?1×106cells/mL1 \times 10^5 - 1 \times 10^6 \, \text{cells/mL}1×105?1×106cells/mL。

染色过程

1. 取细胞悬液：取 100 μL 细胞悬液加入离心管。
2. 加 Annexin V-AbFluor? 647：按说明书加入适量 Annexin V-AbFluor? 647 染色液（一般 5 μL）。
3. 加 PI 染色液：按说明书加入适量 PI 染色液（一般 5 μL）。
4. 混匀与孵育：轻轻吹打混匀细胞悬液，室温避光孵育 15 - 30 分钟。

染色后处理

1. 洗涤去除未结合染料：用 Binding Buffer 洗涤细胞一次，300×g 离心 5 分钟，重悬细胞。
2. 流式细胞仪分析：将细胞悬液转移至流式细胞仪检测管，立即分析。Annexin V-AbFluor? 647 激发波长 633 - 647 nm，发射波长约 660 nm；PI 激发波长 488 - 501 nm，发射波长约 617 nm。

三、质量控制与注意事项

质量控制

1. 保存条件：试剂盒保存于 4℃，避免光照与温度波动，密封防止试剂挥发或受潮。
2. 稳定性：在有效期内性能稳定，每批次经严格质检，确保符合标准。

注意事项

1. 操作环境：实验操作需在无菌环境进行，防止细胞污染。避免物理、化学刺激，以免影响细胞凋亡状态。
2. 染色时间优化：依据细胞类型和实验需求优化染色时间，防止染色不充分或非特异性染色。
3. 避光操作：Annexin V-AbFluor? 647 和 PI 染料光敏，操作时减少样本光照，防荧光淬灭。
4. 细胞状态监测：实验全程观察细胞状态，确保良好生理状态，异常时及时调整条件。